1.2基因工程的基本操作程序复习目标1、简述基因工程原理及基本操作程序。2、尝试设计某一转基因生物的研制过程。复习重点基因工程基本操作程序的四个步骤。复习难点(1)从基因文库中获取目的基因。(2)利用PCR技术扩增目的基因。预学案一、目的基因的获取:1.目的基因:符合人们需要的,编码蛋白质的。2.获取目的基因的常用方法(1)从基因文库中获取目的基因①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多,导人受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。基因组文库:含有一种生物的基因②种类部分基因文库:含有一种生物的基因,如文库。③建立目的:为获得大量的目的基因作准备。④目的基因的获取根据目的基因的有关信息:基因的序列、基因的、基因在上的位置、基因的产物mRNA、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。(2)利用PCR技术扩增目的基因。①PCR:是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术。②条件:有一段已知目的基因的序列。③过程:目的基因DNA受热后解旋为,与结合,然后在的作用下进行延伸形成DNA。④方式:指数扩增=2n(n为扩增循环的次数)(3)化学合成法:基因较小,核苷酸序列已知,可以通DNA合成仪用化学方法直接。例1、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是:①从基因文库中获取目的基因;②利用PCR技术扩增目的基因;③反转录法;④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A.①②③④B.①②③C.②③④D.②③二、基因表达载体的构建1.表达载体的组成:目的基因+++标记基因等。2.启动子:位于基因的,它是的部位,驱动基因转录产生mRNA。3.终止子:位于基因的,终止。4.表达载体的功能:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以给下一代;使目的基因能够和发挥作用。5.标记基因:作用是受体细胞是否含有目的基因。6.由于受体细胞有植物、动物、微生物之分,以及目的基因导入受体细胞的方法不同,基因表达载体的构建上也会有所差别。例2、科学家在培育抗虫棉时,经过了许多复杂的过程和不懈的努力,才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中,然后导入棉花的受精卵中,结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后1在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端),导人棉花受精卵,长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端),导入棉花受精卵,结果成长的植株,有了抗虫能力。由以上过程推知,作为目的基因的运载体应具备的结构是A.目的基因、启动子B.目的基因、终止子C.目的基因、启动子、终止子D.目的基因、启动子、终止子、标记基因三、将目的基因导入受体细胞(一)转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和的过程。(二)常用方法:1.将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌转化法(常用方法)①农杆菌特点:易感染植物和裸子植物,对大多数___________植物没有感染能力;农杆菌中的Ti质粒上的可转移至受体细胞,并整合到受体细胞的染色体的DNA上。②转化过程:目的基因插入农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(2)基因枪法:是单子叶植物中常用的一种基因转化方法,但是成本较高。(3)花粉管通道法:这是我国科学家独创的一种方法,是一种十分简便经济的方法。(我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的)2.将目的基因导入动物细胞(1)方法:注射技术(最常用、最有效的方法)。(2)操作程序:目的基因表达载体→取卵(受精卵)→显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的内发育→新性状动物。3.将目的基因导入微生物细胞(1)原核生物特点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。(2)转化过程:处理细胞→细胞→重组表达载体DNA分子溶于中与感受态细胞混合→细胞吸收DNA分子(需一定的)。例3、采用基因工程的方法培育抗虫棉,下列导入目的基因的做法正确的是①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列,注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列,与质粒重组,导人细菌,用该细菌感染棉的体细胞,再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA...