实验二（2） 转氨酶（GPT）活性的测定 一． 研究背景及目的 转氨酶是生物体内重要的一类酶。转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余 α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。GPT 与 GOT 活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。GPT 催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT 催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP 的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。 二． 原理 由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP 的活性进行测定。转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆 氏法及赖氏法等 较成熟的基本方法，本实验采 用的是金氏法。该方法对转氨酶活力 的定义 是： 血清在 37℃ ，pH7.4 条 件 下 ，与底 物作用60min 后 ，每 生成 1μ M 丙酮酸为一个 转氨酶活性单 位 。丙酮酸含 量的测定运 用的是比 色 法。丙酮酸可与 2,4-二硝 基苯肼 反 应，生成丙酮酸二硝 基苯腙 ，在碱性溶液中显 棕 红 色 ，所以通过测定溶液在 520nm 下 的光 吸 收 值 并与标准 溶液比 色便 可计算出 丙酮酸的含 量，丙酮酸的含 量对应于一定的转氨酶活力 单 位 。 三 ． 材料、试剂 与仪 器 材料： 新鲜家兔肝脏和血清 试剂[1]： ① 磷 酸盐 缓 冲 液（pH7.4） 甲 液： 1/15 mol/L 磷 酸氢 二钠 溶液 乙液： 1/15 mol/L 磷 酸氢 二钾 溶液 取甲 液 825ml，乙液 175ml，混 合 ，测得pH 为 7.4 即 可。 ② GTP 基质液 称取α-酮戊二酸 29.2mg 及 DL-丙氨酸 1.78g，溶于 pH7.4 的磷酸盐缓冲液20ml中，再加缓冲液70ml，并移入 100ml 容量瓶中，加 1mol/L 的氢氧化钠溶液0.5ml，校正 pH 至 7.4，再以 pH7.4 的磷酸盐缓冲液定容。贮存于冰箱中备用...
