革兰染色和血浆凝固酶实验试验仪器及试剂：仪器：载玻片、特种铅笔、试管夹、酒精灯、打火机、接种环、染色盘、显微镜试剂：龙胆紫溶液、碘溶液、脱色液、沙黄溶液、生理盐水、蒸馏水、菌种、金黄色葡萄球菌培育物、EDTA 抗凝兔血浆等实验原理：革兰染色：细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，所以染色的前二步结果是一样的，但在 G+细胞中,乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘的复合物分子太大，不能通过细胞壁，保持着紫色。在 G-细胞中，乙醇处理不但破坏了胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。红色染料虽然也能进入已染成紫色的 G+细胞，但被紫色盖没，红色显示不出来。血浆凝固酶试验：致病的葡萄球菌可分泌游离型凝固酶到菌体外，游离型凝固酶能被血浆中的协同因子激活为凝酶样物质，将液态的纤维蛋白原转变为固态的纤维蛋白而使血浆凝固。实验步骤：革兰染色：1.标记：用特种铅笔在载玻片上画一个小圈，用来大致确定菌液滴的位置。2.涂片：滴加一小滴无菌生理盐水与干净载玻片上，用打火机点燃酒精灯灼烧接种环，待接种环冷却后在培育基中取细菌，然后将菌落或菌苔轻轻涂布散开（菌液标本可直接涂在载玻片上），涂片完成消毒接种环，熄灭酒精灯。3.干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰（火焰上方 15cm 左右，可用手背试温，要求以玻片背面触及手背皮肤热而不烫为宜）4.固定：用高温进行固定，即用夹子夹取载玻片一端，标本面朝上，在酒精的外焰快速来回移动3~4 次，共约 3~4 秒，放置待冷却后染色 5.染色：（1）初染：龙胆紫溶液染色 10s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（2）煤染：碘液染色 10s 后用蒸馏水冲洗，沥去水分（3）脱色：脱色剂脱色 10-20s后用蒸馏水冲洗，沥去水分（4）复染与水洗：沙黄溶液染色 10s 后用蒸馏水冲洗，自然干燥后镜检6.显微镜观察血浆凝固酶试验：1.取一张载玻片做好标记，一侧滴加生理盐水作为对比，一侧滴加兔血浆 2.接种环灼烧消毒，待冷却后用接种环挑取金黄色葡萄球菌在生理盐水侧涂匀；接种环灼烧消毒，待接种环冷却后再跳去金黄色葡萄球菌在兔血浆侧涂匀，5-10 秒内观察结果实验结果...
