第一章1.基因工程:是在分子水平上进行的遗传操作, 指将一种或多种生物体( 供体) 的基因或基因组提取出来, 或者人工合成的基因, 根据人们的愿望进行严密的设计, 经过体外加工重组, 转移到另一种生物体( 受体) 的细胞内, 使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。2.基因工程的基本过程为哪些? 切—接—转—增—检① 获得目的基因: 从供体细胞分离出基因组 DNA, 用内切酶将外源 DNA 切开。——切( 同时选择运载目的基因的载体) ② 目的基因与载体 DNA 拼接: 用 DNA 连接酶将含有外源基因的 DNA 片段接到载体分子上, 形成 DNA 重组分子。 ——接 ③ 重组体分子导入受体细胞: 借助于细胞转化手段将 DNA 重组分子导入受体细胞中。——转 ④ 短时间培育转化细胞, 以扩增 DNA 重组分子或使其整合到受体细胞的基因组中。 ——增⑤ 筛选和鉴定转化细胞, 获得使外源基因高效稳定表示的基因工程菌或细胞。 ——检3.哪些基因是真核生物特有的? ① 假基因: 核苷酸序列同其相应的正常功能基因基本相同, 但却不能合成出功能蛋白质的失活基因。 ② 基因家族: 由功能相关的基因成套组合形成 ③重复序列哪些是原核生物特有的: 插入序列。哪些是真核和原核共有的: 移动基因、 重叠基因第二章1. 寄主细胞控制的限制与修饰宿主控制限制——核酸限制性内切酶宿主控制修饰——修饰的甲基转移酶以 λ(k)噬菌体侵染 E.coli B 菌株为例解释寄主控制与修饰的现象。( 简述寄主控制的限制与修饰现象。 大多数细菌的噬菌体侵染都存在着一些功能性障碍。所谓的寄主控制的限制与修饰现象简称( R/M 体系) 。R/M 体系: 寄主是由两种酶活性配合完成的R/M 体系的作用: 保护自身的 DNA 不受限制; 破坏外源 DNA 使之迅速降解; 2. 简述Ⅰ型、 Ⅱ型和Ⅲ型核酸内切酶的基本特性。( 1) Ⅰ 型酶基本特性① 有内切酶活性和甲基化酶活性——互斥② 需要 ATP、 SAM( S—腺苷甲硫氨酸) 和 Mg 2+辅助因子; ③ EcoB 和 EcoK 是由三种不同亚基组成。γ 多肽链: 特异性亚基, 识别 DNA 序列的活性β 多肽链: 修饰亚基, 具有甲基化酶活性。α 多肽链: 限制亚基: 具有核酸内切酶活性④ 有特定的识别位点⑤ 切割方式: 结合在识别位点, 以滚环形式沿着 DNA 分子转位, 从距识别位点 5 ’一一种是修饰的甲基转移酶——修饰 另一种是核酸内切限制酶——限制侧几千 bp ...
