实验 1:大肠杆菌得培育与分离一、教学要求基本要求1.进行大肠杆菌得扩增,利用液体培育基进行细菌培育得操作2.进行大肠杆菌得分离,用固体平面培育基本进行细菌得划线培育。 进展要求说明大肠杆菌培育得条件与实验原理。说明 二、基本内容1.培育基得种类与化学成份培育基得种类有很多划分标准,按物理性质分:固体培育基与液体培育基(加入琼脂多少)。液体培育基用于扩大培育与工业生产,固体培育基用于菌种分离,鉴定,计数(菌落数量)。培育基得化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 、生长因子等。根据微生物得同化作用类型就是自养还就是异养,碳源不同,自养微生物为无机碳源,如硝化细菌就是二氧化碳或碳酸盐,异养微生物为有机碳源,如大肠杆菌就是葡萄糖等有机物。2.常见微生物类群原核生物(如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等)、原生生物(草履虫、变形虫等)、真菌(酵母菌――出芽生殖、异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌)、病毒等。细菌就是单细胞得原核生物,有细胞壁(肽聚糖)、细胞膜、细胞质,无成型得细胞核,只有一环状 DNA 分子(拟核)。以分裂(二分裂)得方式繁殖,分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌(革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液得颜色)与革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁得成分不同。大肠杆菌就是革兰氏阴性(细胞壁薄,有荚膜)、兼性厌氧得肠道杆菌。3.无菌技术对实验操作空间、操作者得衣着与手进行清洁与消毒;将培育器皿、接种用具与培育基等器具进行灭菌;为避开周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行;避开已灭菌处理得材料用具与周围物品相接触。比较理化因素得作用强度消灭微生物得数量芽孢与孢子能否被消灭消毒较为温与部分生活状态得微生物不能灭菌强烈全部微生物能灭菌方法:① 接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法。② 玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械就是干热灭菌箱。 ③ 培育基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械就是高压蒸汽灭菌锅。④ 表面灭菌与空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械就是紫外灯。4.培育基得配制原则目得要明确:根据培育得微生物种类、培育得目得等确定培育基得类型与配制量。营养要协调:培育基中各种营养物质得浓度与比例要适宜。pH 要适宜:细菌培育基 pH 中性或偏碱性,霉菌培育基呈酸性。5.实验操作步骤(1)配制培育基:计算→称量→溶化→调 pH→分装→加...
