《生物化学》实验指导手册适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程VIP免费

《生物化学》实验指导适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程目录生物化学实验细则···································1目录··············································2实验1蛋白质的沉淀、变性反应······················3实验2醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白·············6实验3SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量···11实验4凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量·············16实验5DNA的琼脂糖凝胶电泳······················20实验6唾液淀粉酶的性质和活力测定·················24实验7生物氧化与电子传递·························25实验8植物体内的转氨基作用·······················27实验1蛋白质的沉淀、变性反应（3学时）目的要求1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。原理在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。这种反应可分为以下两种类型：1．可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶剂中。这种作用称为可逆沉淀反应。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质以及利用等电点的沉淀，提纯蛋白质时，常利用此类反应。2．不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂，强酸、强碱、加热、震荡、超声波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出，因此，变性蛋白质不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。试剂和器材一、试剂1.蛋白质溶液：10ml/组取5ml鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配置。2.蛋白质氯化钠溶液：3ml/组取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后，以纱布滤去不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。3.其余试剂：硫酸铵粉末（10克/组），饱和硫酸铵溶液(150ml)，3%硝酸银（280ml），0.5%乙酸铅（200ml），浓硫酸（5ml/组），5%磺基水杨酸（100ml），0.1%硫酸铜（100ml），饱和硫酸铜溶液（400ml），0.1%乙酸（500ml），10%乙酸（500ml），饱和氯化钠溶液（25ml），10%氢氧化钠溶液（500ml）。二、器材试管（15支/组），过滤漏斗（1个），试管架1个/组，玻璃棒1支/组，沸水浴4台，量筒（总需要20ml×1,200ml×1），烧杯（总需要100ml×2，400×2），试剂瓶（12个/组，附胶头滴管10支/组），移液管（5ml×6/组，1ml×3/组），滤纸1盒，洗瓶1个/组，废液缸1个/组，药匙1个/组，移液管架1个/组操作方法一、蛋白质的可逆沉淀反应—蛋白质的盐析作用(分级盐析)二、蛋白质的不可逆沉淀反应1.重金属沉淀蛋白质2.酸沉淀蛋白质1）2）3.加热沉淀蛋白质取5支试管，编号，按下表加入有关试剂（单位/滴）。蛋白质溶液0.1%乙酸10%乙酸饱和氯化钠10%氢氧化钠蒸馏水123451010101010—5—————55————2—————2722—5将各管混匀，观察记录各管现象后，放入沸水浴中加热10min，比较各管的沉淀情况。思考题试剂管号1.名词解释：水化层；双电层；蛋白质变性；盐溶与盐析；蛋白质等电点沉淀。2.将实验结果写在实验报告中操作方法的对应位置上并就实验现象作简要解释。3.根据实验现象，讨论下列问题：1）蛋白质可逆沉淀...