西花蓟马的SCAR分子检测技术VIP免费

西花蓟马的SCAR分子检测技术孟祥钦1，闵亮1,3，万方浩1,2，周忠实1,2，王文凯3，张桂芬1,2,(1.中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193；2.农业部外来入侵生物预防与控制研究中心，北京100081；3.长江大学农学院，湖北荆州434025)摘要：西花蓟马Frankliniellaoccidentalis(Pergande)是一种世界性入侵害虫，寄主范围广，危害严重，2003年首次在我国发生危害，并有进一步扩散蔓延的趋势。针对蓟马类害虫虫体微小、形态相似，难以准确快速区分的问题，采用特征序列扩增区域（SCAR）标记技术，以西花蓟马及与之同域发生的其他种类蓟马为对象，筛选出1对西花蓟马特异性引物（FOMF/FOMR），其扩增片段大小为320bp。种特异性检测结果显示，该对引物只对西花蓟马的基因组DNA具有扩增能力，对同域发生的花蓟马F.intonsa(Trybom)、禾花蓟马F.tenuicornis(Uzel)、烟蓟马ThripstabaciL.等41种蓟马不具有扩增效果。该对引物不仅对不同虫态的西花蓟马具有扩增能力，而且在西花蓟马发生地的寄主植物组织内亦检测到了其卵的存在。同时，该检测技术灵敏度高，对成虫的最低检出阈值为1/160头。本检测技术在口岸检疫以及花卉、蔬菜和种苗调运中的害虫检测和监测中具有重要意义。关键词：西花蓟马；RAPD-PCR；SCAR；快速检测；特异扩增；检出阈值中图分类号:Q966文献标识码:A文章编号:0454-6296(2010)03-0000-00SCARmarkerforrapididentificationofthewesternflowerthrips,Frankliniellaoccidentalis(Pergande)(Thysanoptera:Thripidae)MENGXiang-Qin1,MINLiang1,3,WANFang-Hao1,2,ZHOUZhong-Shi1,2,WANGWen-Kai3,ZHANGGui-Fen1,2,*(1.StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests,InstituteofPlantProtection,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China;2.CenterforManagementofInvasiveAlienSpecies,MinistryofAgriculture,Beijing100081,China;3.AgricultureCollege,YangtzeUniversity,Jingzhou,Hubei434025,China)Abstract:Thewesternflowerthirps,Frankliniellaoccidentalis(Pergande),isaworldwidepest,causingseriousdamagetoawiderangeofhostplants.ItwasfirstreportedinChinain2003,withatrendoffurtherspreading.Mostofthripsspeciesaresmallinsizeandsimilarinmorphology,whichmakesithardtobedistinguishedquickly.Inthepresentresearch,apairofSCAR(sequencecharacterizedamplifiedregions)primers(FOMF/FOMR)whicharespecifictowesternflowerthripswasdevelopedbyusingotherninefamiliarthripsspeciesasthecontrol.ThefragmentamplifiedbytheprimersFOMF/FOMRwas320bpinlength.SpecificitytestsperformedwiththispairofprimersshowedthatallF.occidentalisspecimensweredetectedpositivelyandnocrossreactionswithother41thripsspecies,includingF.intonsa(Trybom),F.tenuicornis(Uzel)andThripstabaciL.,weredetected.Themethodwastestedonasinglemaleandfemaleadult,asinglepre-pupaandpupa,asinglefirst1st-andorsecond2nd-stageinstarlarva,eandevenasingleegg,andprovedtobe基金项目：国家“973”计划项目（2009CB119200）；国家科技支撑计划项目（2006BAD08A14）；公益性行业（农业）科研专项（200803005）；国家自然科学基金项目（30971967）；中央财政国家重点实验室自主研究课题专项经费（SKL2007SR04）作者简介：孟祥钦，男，1983年12月生，河南濮阳人，硕士研究生，研究方向为入侵生物学与分子生态学，E-mail:mengxiangqin2003@163.com通讯作者AuthorforcCorrespondenceingauthor,E-mail:guifenzhang3@mail.caas.net.cn收稿日期Received：2009-11-25；接受日期Accepted：2010-01-3112345678applicableforthesestagesofF.occidentalis.Moreover,the320bpgenomicDNAfragmentwasclearlyidentifiedinthehostplanttissuescollectedinF.occidentalisinfestedareas.Whenthedilutionwas1/160ofawholefemaleadultofF.occidentalis,the320bpDNAfragmentcouldbeidentifiedforallreplicates.Ourpresentresultsind...