分子检验检测技术课程讲义一、分子诊断又称DNA诊断或基因诊断，是通过从生物体（比如疾病患者等）内提取样本用基因检测方法来判断该生物体是否有基因异常或携带有其它不应该属于该生物体的生物成份。（检测物）病原1DNA加热退火（降温）是否杂交（待检物）病原2DNA加热退火（降温）注意：用于分子检测的器皿都需要消毒、灭菌所用水必须是双蒸水、去离子水二、分子检验检测的意义随着社会经济的发展，国际国内贸易的日趋频繁，有害生物的扩散加速，动植物检疫工作越来越受到重视，由于检疫性有害生物的扩散造成的各类问题备受关注。实现对检疫性有害生物的快速检测是当前社会经济发展的迫切需求。三、分子检验检测与传统检验检测方法的异同传统检验检疫方法：耗时，专业要求高等等，主要是症状上判断：同症状，多病原，疑难多，问题也多，耗时、耗材、耗力，对结果的准确性影响很大，且对专家的要求很高分子检验检测方法：快速，准确等等，直接从遗传物质入手，根据核酸序列来检测，既准确又快速。DNA序列的独特性、专一性的检测标记进行鉴定。四、分子探针，特异性其特点：①三个相连核苷酸组成一个密码子，编码一个氨基酸，共有64个密码子。②密码子之间无核苷酸间隔。③一种氨基酸可有多种密码子。④所有生物使用同一套密码子。分子生物学的基础一、几个简单的问题1.分子生物学主要研究什么？分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构、组成和功能，以及它们在遗传信息和细胞信息传递中的作用等为研究对象是当前生命科学中发展最快并正在与其他学科广泛交叉和渗透的前沿领域；它包括：a、研究核酸结构及其功能的核酸分子生物学；b、研究蛋白质结构与功能的蛋白质分子生物学；c、研究细胞信息传递与细胞信号传导的细胞分子生物学等。2.核酸包括什么？3.核苷酸是怎么连接的？4.什么是一级结构？5.二级结构是什么？6.三级结构呢？7.那么酶切是切什么？几级结构？8.RNA有几种？各有什么功能和特性？二、核酸的理化性质1．粘度2．紫外吸收3．沉降系数4．溶解性5．变性和复性三、思考题请简述生物体、细胞、染色体、蛋白质、核酸、基因等相互间的关系，并阐述分子检验检测的目标对象。三、分子诊断技术概念：利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对病害作出诊断的方法。特点：针对性强、特异性高、灵敏度高、适用性强、诊断范围四、分子诊断的常用技术方法核酸分子杂交技术1.限制性内切酶酶谱分析法2.DNA限制性片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）分析3.等位基因特异寡核苷酸探针（allelespecificoligonucleotide，ASO）杂交法聚合酶链反应（PCR）基因测序基因芯片动植物检疫的理想目标是：防止所有的检疫性有害生物（物质），人为跨境（国家或地区）传播，并及时地发现、限制或铲除外来的检疫性有害生物。动植物病原物检验检疫技术是动植物检疫工作的重要组成部分，在动植物、动植物产品及其他检疫物的装载容器、包装物，以及来自动植物疫区的运输工具中是否有有害生物，或有害生物的种类与数量有多少，只有通过检测才能知道。动植物检验检疫的目的就是要发现、检查和鉴定有害生物，以作为出证放行或作进一步检疫处理的依据。检测检验是判断一个样品内是否存在特定目标病原物，而病害诊断是病害发生原因和性质的鉴定。检测检验技术要求快速、准确、灵敏、安全、高通量、简便、易于标准化和推广应用。有害生物的传统检测鉴定，主要是从症状、形态鉴定、接种鉴别寄主、病原物培养性状等方面来观察有害生物所表现的表型和性状来判断，受环境因素，人为因素等多种因素的影响，往往影响对结果的准确判断。此外，对于病害，许多传统的诊断程序一般都涉及到两个过程：第一，先要对病原物质进行培养，培养后再分析它的生理生化特性；第二，确定它到底是哪一类的病原物，是病毒、细菌还是其他的物质。这种诊断方法成本高、速度慢、效率低。如果病原体生长特别慢或者根本无法通过人工培养的方法获得，例如有些衣原体、植原体就不能培养或很难人工培养，那么这种...
