人力资源-2022microRNA论文：低温环境下microRNA对小鼠脑外伤后海马区神经干细胞VIP专享VIP免费

第1页共13页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共13页microRNA论文：低温环境下microRNA对小鼠脑外伤后海马区神经干细胞增殖分化的调控作用【中文摘要】和近年来,世界各地极端气候事件频繁发生,如2008年初发生于我国南方地区的低温雨雪冰冻天气。低温雨雪冰冻天气可导致交通事故、建筑物倒塌等意外事件增加,颅脑外伤等创伤性疾病发生率急剧上升。受伤后,由于道路湿滑、交通运输困难等原因,病人往往容易暴露于低温环境中。研究表明,低温环境不仅可造成机体局部的损伤,如冻结、冻伤等,而且还可对机体神经系统、循环系统、消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统等造成损害。创伤性颅脑损伤(traumaticbraininjury,TBI)是当今威胁人类生命和健康的主要创伤性疾病之一,其死残率一直居高不下。但是在低温环境影响下,脑外伤后的病理生理过程会发生何种变化目前尚不完全清楚。为了更好地掌握低温环境下颅脑外伤的发病规律及其防治措施,有必要积极开展低温环境下颅脑外伤病理生理学改变的研究。脑外伤可导致大量神经元变性坏死,进而造成神经功能缺损。颅脑损伤后的神经功能重建一直是临床治疗中至今尚未解决的难题。研究证实,脑外伤可诱导成体脑海马齿状回(dentategyrus,DG)亚颗粒区(subgranularzone,SGZ)和室下区(subventricularzone,SVZ)内源性神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)增殖分化,一定程度上修复受损的神经功能。因此,尽可能地提高脑外伤后内源性NSCs增殖分化能力,对于伤后神经功能的重建无疑具有重要意义。但是,有第2页共13页第1页共13页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共13页关脑外伤后NSCs增殖分化调控机制目前尚不完全清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)为一类单链小分子非编码RNA,可通过转录后水平调控靶基因蛋白的表达,有着重要的生理功能,研究已证实其参与了多种生物学过程。然而,哪些特异miRNA可能参与调控及其如何调控脑外伤后NSCs增殖分化目前仍所知甚少；此外,低温环境是否会影响脑外伤后miRNA的表达进而影响NSCs增殖分化过程也不明确。本研究通过建立闭合性脑外伤小鼠模型,4℃低温暴露4h,采用miRNA芯片技术确定脑外伤后海马区]niRNA的表达谱,筛选出差异表达且与NSCs增殖分化相关的特异miRNA,并进行real-timePCR验证。随后挑选1-2个miRNA,进一步观察低温环境下脑外伤后不同时间点海马区特异1miRNA和其相关靶基因的表达变化以及内源性NSCs的增殖情况,以探讨miRNA对脑外伤后NSCs增殖调控作用及低温环境对该调控作用的影响。研究内容和方法：1.闭合性脑外伤小鼠模型的建立和实验分组采用改良的自由落体法构建闭合性脑外伤小鼠模型,于脑损伤后24h处死动物,对脑组织进行HE染色,从病理学上鉴定模型是否成功。实验分为常温脑外伤组和低温脑外伤组,两组又分别分为假手术组、脑外伤4h、1d和3d组。低温脑外伤组动物脑损伤后放置于～4℃低温环境中饲养4h,随后置于～25℃室温喂养。常温脑外伤组动物脑损伤后置于～25℃室温喂养。假手术组不做脑损伤处理。于脑损伤后4h、1d和3d分批处死动物,收集伤侧海马组织待检。2.脑外伤后海马区miRNA表达谱的变化取常温假手术组(对照组)、第3页共13页第2页共13页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共13页常温脑外伤4h组和低温脑外伤4h组海马标本,采用miRNA芯片技术检测低温环境下脑外伤后海马区miRNA的表达谱,筛选脑外伤后差异表达且与NSCs增殖分化相关的特异miRNA,并进行real-timePCR验证。3.脑外伤后海马区miR-34a、Notch1信号分子的表达变化和内源性NSCs的增殖情况3.1采用real-timePCR检测脑外伤各时间点miR-34a的表达水平,明确脑外伤后miR-34a的动态表达变化。3.2采用real-timePCR检测脑外伤后各时间Notch1mRNA的表达水平,明确Notch1基因的表达变化；采用免疫荧光染色检测脑外伤后3d组海马DG区Notch1阳性细胞的表达,明确脑外伤后Notch1蛋白的表达变化。3.3采用免疫荧光染色检测脑外伤后3d组海马DG区Nestin阳性细胞的表达,明确脑外伤后内源性NSCs的增殖情况。结果：1.成功建立闭合性脑外伤小鼠模型：病理学观察可见脑外伤动物脑组织挫裂伤明显,细...