胃蛋白酶与对磺酸基杯芳烃相互作用的研究刘睿*1,3，周兵川2，张军伟1，靳朝喜1，林琳3（1.洛阳市环境监测站，河南洛阳471000；2.嵩县环境监测站，河南嵩县471400；3.郑州大学化学系，河南郑州450052）摘要：采用荧光光谱法和紫外可见分光光度法研究了胃蛋白酶与对磺酸基杯芳烃和对磺酸基杯芳烃相互作用时光谱性质的变化,发现两种对磺酸基杯芳烃对胃蛋白酶的荧光均有猝灭作用，并根据Stern-Volmer方程及紫外－可见吸收光谱得出猝灭机理均为静态猝灭。根据反应的热力学参数得出对磺酸基杯芳烃对胃蛋白酶的作用力均属于静电作用力，并依据Förster无辐射能量转移理论得出荧光给体（胃蛋白酶）－受体（对磺酸基杯芳烃）间的距离r。用同步荧光光谱技术考察了两种对磺酸基杯芳烃对胃蛋白酶构象的影响。关键词：胃蛋白酶；对磺酸基杯芳烃；荧光光谱法；相互作用中图分类号：O657.3文献标识码：A文章编号：Studyontheinteractionbetween4-Sulfoniccalixareneandpepsin.LIURui*1,3,ZHOUBing-chuan2,ZHANGJun-wei1,JINChao-xi1,LINLin3,(1.LuoyangEnvironmentalMonitoringStation,Luoyang471000,China;2.SongxianEnvironmentalMonitoringStation,Luoyang471000,China;3.DepartmentofChemistry,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)Abstract:SpectrumPropertiesstudyontheinteractionof4-Sulfoniccalixareneand4-SulfoniccalixarenewithpepsinwereinvestigatedbyfluorescencespectroscopyandUV-visabsorptionspectroscopy.Wefoundthatthetwo4-Sulfoniccalixarenecouldquenchthefluorescenceofpepsin.BasedontheStern-VolmerequationandUV-visspectrum,thequenchingmechanismswereallstaticquenching.Thethermodynamicparameterswerecalculated,andindicatedthattheelectrostaticforcesplayedamajorroleintheinteractionbetween4-Sulfoniccalixareneandpepsin.Thedistancerbetweenthedonor(pepsin)andtheacceptor(4-Sulfoniccalixarene)weredeterminedaccordingtoFörsternon-radiativeenergytransfertheory.Theeffectof4-Sulfoniccalixareneontheconformationofpepsinwasinvestigatedbysynchronousfluorescencespectrum.Keywords:Pepsin;4-Sulfoniccalixarene;Fluorescencespectroscopy;Interaction胃蛋白酶（Pepsin）是胃液中主要的蛋白酶，属于水解蛋白酶中的羧基蛋白酶，因含有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸残基而能发射荧光。胃蛋白酶自Northrop于1929年将其结晶以来[1]就在生命科学[2]、食品科学[3]、分析化学[4]等领域得到了广泛的研究，至今仍是人们关注的研究热点之一。杯芳烃是一类由苯酚和甲醛缩合而成的大环化合物,由于具有与环糊精和冠醚相似的性质而被誉为第三代主体分子。水溶性杯芳烃于1955年由Cornforth发现具有抗结核的性质[5]，从此对于水溶性杯芳烃在制药方面的应用越来越受到研究者的关注[6]。本文在模拟人体生理条件（pH为2.6，离子强度为0.1mol·L-1）下，采用荧光光谱和紫外可见光谱技术，研究了对磺酸基杯[4]芳烃（简称为SCX4）和对磺酸基杯[6]芳烃（简称为SCX6）与胃蛋白酶（简称为Pep）的相互作用时光谱性质的变化，计算了猝灭常数和热力学参数，同时考察了两种对磺酸基杯芳烃对Pep构象的影响。方法灵敏简便，以期为水溶性杯芳烃在药物研究及药物在人体内的作用情况提供有用的实验数据。1实验部分1.1仪器与试剂日立F-3010型荧光光度计；UNICOUV-2102PC型紫外可见分光光度计；HANAPH213型酸度计；TB-85型恒温水浴锅。Pep（中国医药上海化学试剂公司）：配制成1×10-4mol·L-1的储备液并于4℃冰箱保存；1.00×10-3mol·L-1SCX4、SCX6溶液（AcrosOrganics公司）；pH=2.6的0.2mol·L-1NaAc-HAc缓冲溶液（内含0.1mol·L-1的NaCl溶液）；所用试剂均为分析纯以上，实验用水为二次蒸馏水。1.2实验方法在一系列10mL比色管中依次加入2mLPep储备液、2mLNaAc-HAc缓冲溶液、一定量的对磺酸基杯芳烃溶液，稀释定容后将试管置于恒温槽中并调节温度为20℃和35℃，放置15min，选择最大激发波长278nm，测定体系的荧光光谱。固定激发波长和发射波长间距Δλ为90nm，记录同步荧光光谱...
