转基因抗虫棉花检测技术规范——定性PCR筛查方法（试行）第2页共17页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共17页编制说明为进一步加强对转基因抗虫棉花的安全监管，维护研发者、经营者和生产者的合法权益，保障人类健康和生态环境安全，根据《农业转基因生物安全管理条例》及其配套管理办法的规定和《关于加强转基因抗虫棉安全管理与监督检查的通知》(农办科[2005]15号)的要求，满足开展技术检测工作的需要，特制定本技术规范。1、编制原则本技术规范的编制遵循以下原则：(1)法治性：本技术规范的编制，严格执行国家法律法规和强制性标准的规定，以保证国家和研发者、经营者、生产者的权益。(2)可靠性：本技术规范的编制，力求反应相关领域研究成果的先进性、成熟性和代表性，以保证检测结果的精确性和重复性。(3)实用性：本技术规范的编制，力求把经济实用和技术实用结合起来，以保证检测的操作简便和费用低廉。(4)规范性：本技术规范的编制，力求做到技术内容叙述正确无误、文字表达简明易懂，以保证检测人员准确把握。(5)操作性：本技术规范的编制，力求将操作过程中的要点进行细化和量化，以保证检测人员操作方便。(6)兼容性：本技术规范的编制，参考和借鉴了国外同类标准或规范内容，以保证既符合国情又尽可能与国际接轨。第3页共17页第2页共17页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共17页2、编制依据本技术规范编制的法律依据主要有：(1)《农业转基因生物安全管理条例》——中华人民共和国国务院令第304号；(2)《农业转基因生物安全评价管理办法》——中华人民共和国农业部令第8号；(3)《农业转基因生物进口安全管理办法》——中华人民共和国农业部令第9号；(4)《农业转基因生物标识管理办法》——中华人民共和国农业部令第10号。3、适用范围转基因抗虫棉花可从以下三个方面进行检测：(1)筛查检测：利用通用序列分别设计引物对棉花Sad1内标准基因、CaMV35S启动子、NOS终止子以及cry1Ac基因或者cry1Ab基因或者cry1Ac和cry1Ab的融合基因进行PCR扩增，筛查确定样品是否含有转基因成分，以判断送（抽）检样品是否为转基因抗虫棉花。(2)特异性检测：利用外源基因特异序列设计特异性引物对转基因抗虫棉花品种进行PCR扩增，检测确定样品所含外源基因类型，以判断送（抽）检样品是否为国家批准种植或在国家批准区域内种植的转基因抗虫棉花。第4页共17页第3页共17页送（抽）检样品确定含转基因成分否确定含目标基因类型确定品种（组合）名称通用引物检测特异引物检测特征特性检测编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第4页共17页(3)品种（组合）鉴定：结合转基因抗虫棉花品种（组合）的特征、特性检测与鉴定，进一步检测或鉴定转基因抗虫棉花的品种（组合）名称，以判断该品种（组合）是否为国家批准种植或在国家批准区域内种植的转基因抗虫棉花。具体检测技术路线流程如下图所示，可根据检测工作的实际需要，选择相应的检测技术路线。转基因抗虫棉花检测技术路线流程图本技术规范规定了转基因棉花定性PCR筛查方法，适用于转基因棉花中转基因成分的定性PCR筛查。特异性检测和品种（组合）鉴定的技术规范，将根据实际情况适时予以发布。4、检测方法第5页共17页第4页共17页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第5页共17页本技术规范包括棉花的Sad1基因和转基因抗虫棉花中的CaMV35S启动子、NOS终止子、cry1Ac基因、cry1Ab基因、cry1Ac与cry1Ab融合基因的定性PCR筛查方法。5、检测条件本技术规范实施的检测机构应具备以下条件：(1)具备PCR检测所需的仪器设备和技术人员；(2)具备相对独立的分子生物学检测实验室及其配套设施；(3)客观、公正和中立，不从事转基因棉花的研发工作；(4)承担检测的法律义务和责任，按规定对检测结果保密；(5)严格执行农业部质量检验监督中心的管理规定和检测程序。本技术规范受农业部农业转基因生物安全管理办公室委托，由农业部科技发展中心、中国农业科学院、南京农业大学、中国科学院、山东省农业科学院、吉林省农业科学院编制。编制人员...
