化学工程与装备ChemicalEngineering&Equipment2008年第9期2008年9月HEPES和NaHC03对RPMI.1640培养液的渗透压和pH值的影响李岩松1’2,柳增善1,周玉1(1.人兽共患病教育部重点实验室,吉林长春130062;2.吉林大学军需科技学院;吉林长春130062)摘要:本文对实验室利用RPMI.1640干粉配制培养液时易忽视的渗透压和pH值等因素进行了比较分析,提出配制培养液时对渗透压和pH值控制的关键因素。关键词:R.PMIl640;培养液;渗透压;pH值RPMI.1640培养液是杂交瘤技术制备单克隆抗体最常用的培养基之一。本文在RPMI—1640粉(不含HEPES和NaHC03)按说明书配制培养液(以5%C02平衡为例)的基础上对HEPES和NaHC03的添加量、培养液pH值和渗透压、血清渗透压等因素进行了对比分析。l材料和方法1.1材料1.1.1主要试剂RPMI.1640粉(不含HEPES和NaHC03),GBICO;HEPES,Amresco;NaHC03、NaOH,国产分析纯;玻璃三蒸水;血清(某国产胎牛血清);杂交瘤细胞株(本室冻存)1.1.2主要器材C02培养箱(Lishen,香港);渗透压仪(Advanced3250,美国);精密酸度计(Phs.3C,上海雷磁);玻璃蒸馏水器(Sz.93,上海亚荣);密立博滤器(0.22岫,m3.5cm);细胞培养板(Costa);细胞培养瓶(玻璃)1.1.3试剂配制培养基原液(按每袋培养基粉加水900ml溶解),7.5%NaHC03,1mol/LNaOH,lmo儿HEPES,高压灭菌三蒸水,以上均滤过除菌。1.2方法1.2.1无HEPES和NaHC03的RPMI—1640基础培养液培养基原液:水(9:1),测定pH值和渗透压:1.2.2血清的pH值和渗透压某国产胎牛血清(两个批号)直接测定其pH值,并通过冰点渗透压仪直接测定渗透压。1.2.3按说明书添加NaHC03的RPMI一1640基础培养液根据培养基粉说明书,按每袋培养基粉添加29NaHCo。,加水至1L(用NaoH调pH值至7.4),测定渗透压。1.2.4NaHCOs与pH值和渗透压的关系按1.2.1方法配制基础培养液,并按0.5、1.0、2.0、3.O、4.0g/L的比例添加NaHCOs,分别测定pH值和渗透压。以加入NaHCos的体积数为横坐标,渗透压和pH值为纵坐标,分别做NaHCO。.渗透压和NaHCOs.pH坐标图。1.2.5NaoH与pH值和渗透压的关系按1.2.1方法配制基础培养液,并按1.O、2.0、3.O、4.0、5.0ml/L的比例添加NaOH,分别测定pH值和渗透压。以加入Na0H的体积数为横坐基金项目:国家自然科学基金资助项目(30771657,30671762)万方数据李岩松,HEPES和NaHc嘎对RPMI—1640培养液的渗透压和pH值的影响4l标,渗透压和pH值为纵坐标,分别做NaoH-渗透压和NaOH.pH坐标图。1.2.6NaHCOa、HEPES对培养液渗透压和pH的影响按1.2.1方法配制基础培养液,设1.59/L、2.09/L、2.59/L三个NaHCOs添加浓度,每个NaHCO。添加浓度再设10、15、20、25mmol/L四个HEPES添加浓度,分别用1mol/LNaoH调pH值至7.4,测定渗透压。1.2.7培养液质量的评价通过细胞生长曲线评价培养液的质量。分别将1.2.3(样品编号13)和1.2.6(样品编号l~12)所配基础培养液,加入15%血清,测定pH值和渗透压。分别用上述培养液将杂交瘤细胞稀释至104个/mL,各取lmL加入24孔板,并在37℃,5%C02图lNaHc03、Na0H与pH值的关系№lRe蜥∞‰NaHoqorN删andpHval嵋△Rc衄ionbetWeen7.5%NaHC03锄dpHval鹏oIklationbetv睇nlm01/I。NaOH锄dpHvaJue2.3NaHCOs、HEPES对培养液渗透压和pH的影响加入不同浓度NaHCos和HEPES后,基础培养箱中培养一周,绘制杂交瘤细胞生长曲线,以此评价各培养液质量。2结果与分析2.1RPMI.1640基础培养液(无HEPES和NaHC03)及血清的pH值和渗透压无HEPES和NaHC03的RPMI—1640基础培养液的pH值为7.2、渗透压为226mOsnl/l(g:血清的pH值为7.0、渗透压230mOsm/I(g。其中仅血清的渗透压与产品标识不符(280.340mOs删傲g)。2.2NaHcO。及NaoH与pH值和渗透压的关系测定结果见图1和图2。从图中可以看出在pH7.0~8.O之间,用7.5%NaHC03调节培养液的pH值时所需的量多,且对培养液渗透压影响也大;用lNNaOH调节培养液的pH值时所需的量少,且对培养液渗透压影响也小。图2NaHC03、NaoH与渗透压的关系F毽2Rcl砸∞be“僦nNa}配030fN扣Hand啁fr刚c脚潞u陀●Rehtionbetw∞n7.5%:NaHC03...