HEPES和NaHCO31640培养液的的影响VIP专享VIP免费

化学工程与装备ChemicalEngineering＆Equipment2008年第9期2008年9月HEPES和NaHC03对RPMI．1640培养液的渗透压和pH值的影响李岩松1’2，柳增善1，周玉1(1．人兽共患病教育部重点实验室，吉林长春130062；2．吉林大学军需科技学院；吉林长春130062)摘要：本文对实验室利用RPMI．1640干粉配制培养液时易忽视的渗透压和pH值等因素进行了比较分析，提出配制培养液时对渗透压和pH值控制的关键因素。关键词：R．PMIl640；培养液；渗透压；pH值RPMI．1640培养液是杂交瘤技术制备单克隆抗体最常用的培养基之一。本文在RPMI—1640粉(不含HEPES和NaHC03)按说明书配制培养液(以5％C02平衡为例)的基础上对HEPES和NaHC03的添加量、培养液pH值和渗透压、血清渗透压等因素进行了对比分析。l材料和方法1．1材料1．1．1主要试剂RPMI．1640粉(不含HEPES和NaHC03)，GBICO；HEPES，Amresco；NaHC03、NaOH，国产分析纯；玻璃三蒸水；血清(某国产胎牛血清)；杂交瘤细胞株(本室冻存)1．1．2主要器材C02培养箱(Lishen，香港)；渗透压仪(Advanced3250，美国)；精密酸度计(Phs．3C，上海雷磁)；玻璃蒸馏水器(Sz．93，上海亚荣)；密立博滤器(0．22岫，m3．5cm)；细胞培养板(Costa)；细胞培养瓶(玻璃)1．1．3试剂配制培养基原液(按每袋培养基粉加水900ml溶解)，7．5％NaHC03，1mol／LNaOH，lmo儿HEPES，高压灭菌三蒸水，以上均滤过除菌。1．2方法1．2．1无HEPES和NaHC03的RPMI—1640基础培养液培养基原液：水(9：1)，测定pH值和渗透压：1．2．2血清的pH值和渗透压某国产胎牛血清(两个批号)直接测定其pH值，并通过冰点渗透压仪直接测定渗透压。1．2．3按说明书添加NaHC03的RPMI一1640基础培养液根据培养基粉说明书，按每袋培养基粉添加29NaHCo。，加水至1L(用NaoH调pH值至7．4)，测定渗透压。1．2．4NaHCOs与pH值和渗透压的关系按1．2．1方法配制基础培养液，并按0．5、1．0、2．0、3．O、4．0g／L的比例添加NaHCOs，分别测定pH值和渗透压。以加入NaHCos的体积数为横坐标，渗透压和pH值为纵坐标，分别做NaHCO。．渗透压和NaHCOs．pH坐标图。1．2．5NaoH与pH值和渗透压的关系按1．2．1方法配制基础培养液，并按1．O、2．0、3．O、4．0、5．0ml／L的比例添加NaOH，分别测定pH值和渗透压。以加入Na0H的体积数为横坐基金项目：国家自然科学基金资助项目(30771657，30671762)万方数据李岩松，HEPES和NaHc嘎对RPMI—1640培养液的渗透压和pH值的影响4l标，渗透压和pH值为纵坐标，分别做NaoH-渗透压和NaOH．pH坐标图。1．2．6NaHCOa、HEPES对培养液渗透压和pH的影响按1．2．1方法配制基础培养液，设1．59／L、2．09／L、2．59／L三个NaHCOs添加浓度，每个NaHCO。添加浓度再设10、15、20、25mmol／L四个HEPES添加浓度，分别用1mol／LNaoH调pH值至7．4，测定渗透压。1．2．7培养液质量的评价通过细胞生长曲线评价培养液的质量。分别将1．2．3(样品编号13)和1．2．6(样品编号l～12)所配基础培养液，加入15％血清，测定pH值和渗透压。分别用上述培养液将杂交瘤细胞稀释至104个／mL，各取lmL加入24孔板，并在37℃，5％C02图lNaHc03、Na0H与pH值的关系№lRe蜥∞‰NaHoqorN删andpHval嵋△Rc衄ionbetWeen7．5％NaHC03锄dpHval鹏oIklationbetv睇nlm01／I。NaOH锄dpHvaJue2．3NaHCOs、HEPES对培养液渗透压和pH的影响加入不同浓度NaHCos和HEPES后，基础培养箱中培养一周，绘制杂交瘤细胞生长曲线，以此评价各培养液质量。2结果与分析2．1RPMI．1640基础培养液(无HEPES和NaHC03)及血清的pH值和渗透压无HEPES和NaHC03的RPMI—1640基础培养液的pH值为7．2、渗透压为226mOsnl／l(g：血清的pH值为7．0、渗透压230mOsm／I(g。其中仅血清的渗透压与产品标识不符(280．340mOs删傲g)。2．2NaHcO。及NaoH与pH值和渗透压的关系测定结果见图1和图2。从图中可以看出在pH7．0～8．O之间，用7．5％NaHC03调节培养液的pH值时所需的量多，且对培养液渗透压影响也大；用lNNaOH调节培养液的pH值时所需的量少，且对培养液渗透压影响也小。图2NaHC03、NaoH与渗透压的关系F毽2Rcl砸∞be“僦nNa}配030fN扣Hand啁fr刚c脚潞u陀●Rehtionbetw∞n7．5％：NaHC03...