沉淀反应沉淀反应沉淀反应Ag+AbIC可溶性抗原（如血清、毒素等）温度、pH浓度、电解质分类分类沉淀反应环状沉淀反应絮状反应琼脂扩散试验双向扩散单向扩散＋电泳技术火箭免疫电泳对流免疫电泳实验目的：用已知抗体检测未知IgG抗原。一、双向免疫琼脂扩散实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体琼脂内进行扩散，当两者比例合适时，就出现白色沉淀线（阳性反应）。一、双向免疫琼脂扩散材料：1％盐水琼脂，诊断血清【IgGAb】,阳性血清（IgGAg），生理盐水，待检血清甲、乙。载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。一、双向免疫琼脂扩散实验方法：1、融化1％盐水琼脂；2、制备半固体琼脂凝胶板：4~5ml/片3、打孔：梅花孔(如图)4、加样（每孔约10μl）；5、标记，放湿盒，37℃温箱24h后观察结果。诊乙阴乙阳甲甲诊乙阴乙阳甲甲实验结果分析11Anti-1一、双向免疫琼脂扩散一、双向免疫琼脂扩散结果判读：结果判读：阳性血清与诊断血清间阳性血清与诊断血清间形成形成沉淀线沉淀线生理盐水与诊断血清（抗体）之间生理盐水与诊断血清（抗体）之间无无沉淀线沉淀线如果待检血清与诊断血清间形成沉淀线，而且与阳性对如果待检血清与诊断血清间形成沉淀线，而且与阳性对照的沉淀线融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。照的沉淀线融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。诊乙阴乙阳甲甲二、对流免疫电泳【实验原理】蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷。对流免疫电泳实验原理电泳力电渗力【实验材料】【实验材料】11．电泳缓冲液：．电泳缓冲液：pH8.6pH8.6巴比妥缓冲液。巴比妥缓冲液。22．抗体：诊断血清（．抗体：诊断血清（IgGIgG抗体）。抗体）。33．抗原：阳性血清、待检血清。．抗原：阳性血清、待检血清。44．．11％盐水琼脂。％盐水琼脂。55．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。液器、移液头。【实验方【实验方法】法】11．制板．制板22．打孔：双排孔．打孔：双排孔33．．加样加样44．电泳将加好样品的琼脂板置电泳槽．电泳将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压搭好桥后，接通电源，控制电压66～～10V/c10V/cmm板长，电泳约板长，电泳约3030～～60min60min。。55．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。甲诊正极NS诊乙诊甲诊阳诊乙诊负极AgAbAgAb加样甲诊NS诊乙诊甲诊阳诊乙诊【实验结果】【实验结果】将玻片对着强光源观察，生理盐水孔将玻片对着强光源观察，生理盐水孔与诊断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血清之与诊断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血清之间有白色沉淀线，若待检血清孔与诊断血清孔之间间有白色沉淀线，若待检血清孔与诊断血清孔之间有沉淀线出现，则表示有沉淀线出现，则表示IgGIgG阳性，否则为阴性。阳性，否则为阴性。诊乙阴乙阳甲甲甲诊正极NS诊乙诊甲诊阳诊乙诊负极AgAbAgAb诊乙阴乙阳甲甲
