©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.netVol.14,2007,No.1粮食与食品工业CerealandFoodIndustry食品科技收稿日期:2006-08-31修回日期:2006-10-10作者简介:郝少莉,女,1982年出生,硕士研究生,主要从事食品分离技术的研究工作。沉淀分离技术在蛋白质处理方面的应用郝少莉,仇农学陕西师范大学食品工程系(西安710062)摘要:概述了蛋白质处理方面的几种常用沉淀分离技术的基本原理、特点、所用试剂及影响因素等。关键词:蛋白质;沉淀分离中图分类号:TS201.2+1文献标识码:B文章编号:1672-5026(2007)01-0020-03ApplicationsofprecipitationseparationtechnologiesinhandlingproteinHaoShaoli,QiuNongxueDepartmentofFoodEngineering,ShaanxiNormalUniversity(Xi’an710062)Abstract:Thebasicprinciple,characteristic,reagentandeffectfactorsofseveralprecipitati2onseparationtechnologiesusedinhandlingproteinaresummarized.Keywords:protein;precipitationseparation具有生理活性的蛋白质类物质在维持现代人类健康方面已必不可少,在医疗和食品领域已逐渐得到广泛应用。蛋白质具有多种功能性质,每一种特性都会给食品及其加工过程带来特定的效果[1]。一方面,蛋白质作为功能性物质,常存在于复杂的混合体系中,因此,需要将其从原料中分离纯化;另一方面,蛋白质是一种不稳定的有机高分子物质,往往会给生产加工带来不利,故也需要对其进行分离纯化。作为一种应用较早的分离技术,沉淀分离已在蛋白质分离中广泛应用[2]。1无机沉淀剂沉淀分离法———盐析法[3]1.1基本原理及特点盐析沉淀是蛋白质和酶提纯工艺中最早采用,且至今仍广泛应用的方法。其原理是蛋白质在高浓度盐溶液中,随着盐浓度的逐渐增加,由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。盐析法的特点是成本低,不需要特别设备,操作简单、安全,对蛋白质的一些生物活性成分破坏较少,缺点是选择性不强。应用实例有大豆异黄酮的提取和大豆蛋白质的分离,其基本工艺流程为:大豆豆粕→乙醇提取→过滤→盐析→离心[2]。1.2盐的种类及选择蛋白质盐析常采用中性盐,主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中,应用最广泛的是硫酸铵,其优点有:①溶解度大。25℃时大约每升水可溶解767g硫酸铵,在此溶解度范围内,许多蛋白质和酶都能被盐析沉淀出来;②温度系数小。在低温时,硫酸铵的溶解度受温度影响不大,对于需要在低温条件下进行纯化的酶,有利于保持酶的活性;③硫酸铵不易引起蛋白质变性,对于多种酶还具有保护作用,且价格低廉,来源丰富;④使用后的废液可作为农作物氮肥[4]。缺点:①缓冲能力较小;②硫酸铵中含有氮,因此,影响蛋白质的定量分析,尤其是在采用凯氏定氮法和双缩尿法进行测定时。02©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net粮食与食品工业CerealandFoodIndustryVol.14,2007,No.11.3盐析法的影响因素①蛋白质种类。不同溶质的盐析常数(Ks)和盐浓度为0时,蛋白质溶解度的对数值(β)均不相同,所需的离子强度也不同;②蛋白质浓度。蛋白质浓度较大时,中性盐的极限沉淀浓度低,共沉作用强,分辨率低,但用盐量少,蛋白质溶解损失小;而蛋白质浓度较小时,情况相反,故一般蛋白质浓度控制在2%～3%为宜;③pH值。当pH值在蛋白质等电点附近时,用盐量少,蛋白质得率高;④温度。温度升高,蛋白质溶解度升高,而多数蛋白质在高盐浓度下,其溶解度反而下降,如胃蛋白酶,但大豆球蛋白例外;⑤离子强度。对于同一类型的蛋白质,随离子强度由低到高的变化,蛋白质也随之发生由盐溶至盐析的变化。对不同类型的蛋白质,盐析时所要求的离子强度不同,一般分离多种蛋白质时采用分步盐析法;⑥离子类型。通常情况下,半径小、带较高电荷的离子盐析效果较好。2有机沉淀剂的沉淀分离技术2.1基本原理及特点向蛋白质溶液中加入丙酮或乙醇等水溶性有机溶剂,降低水的活度,随着有机溶剂浓度的增大,水对蛋白质分子表面荷电基团或亲水基团的水化程度降低,溶液的介电常数下降,蛋白...
