表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的优化VIP免费

第27卷第1期2013年2月高校化学工程学报JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversitiesNO．1、bl27Feb．2Ol3文章编号：1003-9015(2013)01．0096．06表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的优化刘国庆，陈飞，赵亮，范里，谭文松(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237)摘要：在自主研发无蛋白培养基的基础上，考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明，对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充，虽然不能促进细胞生长，但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成；B族维生素的添加能促进细胞生长并延长培养时间；作为重要的碳源和能源，葡萄糖浓度较高时会抑制细胞生长，而浓度较低时不能有效支持细胞生长与抗体合成，维持其在适当浓度有利于细胞生长并能延长培养时间，从而有利于提高抗体产量。通过合理调整各营养物的浓度配比形成了优化的无蛋白培养基，CHO细胞在该培养基中的最高密度达到52．6×10ceils．mL～，抗体产量达到274mg．L～，与初始培养基相比分别提高了33％和63％。总之，在细胞培养过程中应维持充足且平衡的营养物成分，以有效供应细胞生长与抗体合成的需求。关键词：CHO细胞；单克隆抗体；无蛋白培养基；优化中图分类号：Q813．1文献标识码：ADOI：10．3969／j．issn．1003．9015．2013．O1．016OptimizationofProtein—freeCultureMediumforCHOCellsProducingMonoclonalAntibodyLIUGun-qing，CHENFei，ZHAOLiang，FANLi，TANWen—song(StateKeyLabofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceandTechnology,Shanghai200237，China)Abstract：Basedonaprotein—freeculturemediumwithindependentintellectualpropertyrightsownedbyourlab，theefectsofaminoacids，vitaminsandglucoseoncellgrowth，metabolismandantibodyproductionwereinvestigated．ItWasfoundthatsupplementationofthosemostconsumedaminoacidspromotescellviabilityandantibodyproductioninthelaterstage，howeverthesupplementationdoesn’tpromotethecellgrowthandthecellconcentrationremainsunchanged。ThereasonableadditionofsomeBvitaminsimprovescellgrowthandextendscultureduration．Asanimportantcarbonandenergysource，highconcentrationofglucoseinhibitscellgrowth，whilelowconcentrationwillbeineficienttosupportthecellgrowthandantibodyproduction．Itwasdemonstratedthatbymaintainingtheglucoseconcentrationinanoptimalrange，cellgrowthisimprovedandculturedurationisprolonged，whicharefavorableforantibodyproduction．Byoptimizingthefractionsofnutrientcomponentsinthebasalculturemedium，anoptimalprotein-freeculturemediumforCHOcellsWasdeveloped．ThemaximumviableeelIconcentrationandantibodyproductivityinthatmediumare52．6×lO’cells·mL～and274mg·L一，respectively,whichrepresentanincreaseof33％and63％incomparisonwiththoseinbasalculturemedium．Inbrief,thenutrientsinculturemediumshouldbesuficientandbalancedforcellgrowthandantibodyproduction．Kevwords：CH0cells；monoclonalantibody；protein-freeculturemedium；optimization1前言CHO细胞在生物制药产业中应用广泛，是生产抗体的首选宿主【1，2】。单克隆抗体在相关疾病的治疗方面具有重要的价值，而抗体类药物临床使用剂量大和动物细胞表达抗体能力低的矛盾限制了抗体类药物收稿日期：2011-06．09；'量订日期：2011-10．28。基金项目：国家自然科学基金(21106045)：国家863计划项目(2012AA02A303；2010AA022905)：上海高校青年教师培养资助计划OalgllO11)。作者简介：刘国庆(1987-)，男t安徽安庆人，华东理工大学硕士生。通讯联系人；赵亮，E-mlhzlmoliang@eeust．educa堑!鲞第1期刘国庆等：表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的优化的运用，因此如何通过动物细胞培养技术提高抗体产量一直是研究的热点。动物细胞体外培养所需的营养成分复杂(包括碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等)且需求量大，培...