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毕业论文题目乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证年级2011级层次专科专业临床医学班级一班姓名学号指导教师职称2014年5月6日辽宁医学院继续教育学院制目录摘要关键词英文前言1.材料与方法1.1试剂盒1.2仪器1.3方法1.3.2．铺板方案1.3.3．加样步骤2.结果2.1标准曲线与线性范围2.2准确度（回收率）的验证2.3精密度的验证2.3.1板内精密度的验证2.3.2板间精密度的验证2.4检测限（LOD）计算3.讨论3.1乙肝表面抗原定量分析的意义3.2常用定量分析方法3.3方法概述3.4方法学验证内容3.5结果分析及应用评价参考文献致谢附录1乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证摘要目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应<15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml，低浓度样品（<1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。关键词乙肝表面抗原ELISA定量分析方法学验证ThereificationoftheHBsAgELISAquantitativemethodologyAbstractObject:toverifythequantitativemethodologyofFuzhoublueprintbiologicalengineeringcompanytomakesurewhetheritcabeusedtotheanalysisofClinicalSample.Methods:ELISAquantitativemethodology,makeanApplicationofthestandardHBsAgkitfromtheconcentrationof8ng/mldo2timesdilutedsixconcentrationgradienttoconstituteastandardcurve,testingWith6,3,1.5ng/ml3aconcentrationgradient5accuratelypreciseanddetection.Results:standardcurve,R2=0.997,theaccuracyofRSDof1.5ng/mis16.78%，theRSDthatcannotmeetthedemandofng/mlbasiclevelislessthan<15%incommon.TheLODis0.172ng/ml,thetestingofLowconcentrationsamples（<1.5ng/ml）arelowerthanhighconcentrationsamplesinbothaccuracyandprecision,whichasaresultmakeitunsuitableforlowconcentrationsampletesting.Conclusion:theELISAquantitativeanalysiskitofHBsAgcannotbeusedfortheanalysisofClinicalSample.KeywordsHBsAgQuantitativeanalysisVerificationMethodology.前言2乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。ELISA法具有较高灵敏度特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。1.材料与方法1.1试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。1.2仪器酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：MilliporeElix；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。1.3方法1.3.1．溶液配置1×PBS缓冲液的配置：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。标准品的配置：原始标准品浓度为8ng/ml。。取6个2mlEP管，分别标记为S1-S6。50ul/well,共1孔需50ul，每孔配置60ul备用，按照下表稀释方案进行稀释。质控品的配置：50ul/well,共5复孔需250ul，配置300ul备用，取3个2mlEP管，分别标记为C1，C2，C3，按照下表稀释方案进行稀释。编号终浓度（ng/ml）预加1×PBS取剩余（ul）标记（ul）S180标准品120S2460S16060S32...