高效液相色谱基础知识VIP免费

1第一节第一节岛津岛津LC-10ATLC-10AT型型HHPLCPLC操作规程操作规程2目的:规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。范围:适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。职责:质检员对本规程的实施负责。3一、一、系统组成系统组成本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。4二、二、准备准备1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。2、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。3、配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。三、开机6四、四、参数设定参数设定1、波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。2、流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3、流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。7四、四、参数设定参数设定4、梯度设定：4.1：在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键；4.2：用数字键输入时间，按[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键；4.3：重复上一步设定其它时间步骤；4.4：用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。按[CE]键退出。8五、五、更换流动相并排气泡更换流动相并排气泡1：将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2：逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；3：按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4：将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。6：如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。9六、六、平衡系统平衡系统1、查看基线：1.1：按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，1.2：输入实验信息并设定各项方法参数后，1.3：按下“数据收集”页的[]按钮。10六、六、平衡系统平衡系统2、等度洗脱方式2.1：按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。2.2：检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。2.3：观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。2.4：观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。11六、六、平衡系统平衡系统3、梯度洗脱方式3.1：以检验方法规定的梯度初始条件，按2项下方法平衡系统。3.2：在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。12七、七、进样进样1、进样前按检测器[zero]键调零，按软件中[零点校正]按钮校正基线零点，再按一下[查看基线]按钮使其弹起。2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次。13八、八、谱图的判断谱图的判断及结果计算及结果计算系统适用性实验：三个重要指标①分离度（加强）：一般应≥1.5。②重复性：两次谱图的峰面积应相差不的过1%。③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。④拖尾因子：0.95＜T＜1.05⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致...