课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)原理：人为提供有利于生长的条件(包括、、pH等)，同时或阻止其他微生物的生长。(2)选择培养基：允许的微生物生长，同时或其他种类微生物生长的培养基。目的菌株营养温度抑制特定种类抑制阻止2．统计菌落数目(1)常用方法：。当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。(2)测定微生物数量的常用方法还有。3．设置对照：排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。稀释涂布平板法稀释度显微镜直接计数法非测试因素可信度活菌二、实验设计土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察1．土壤取样一般要铲去，因为绝大多数细菌分布于距地表约的土壤层。2．样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同。(填表)微生物细菌放线菌真菌稀释倍数表层土3～8cm104、105、106103、104、105102、103、1043.微生物的培养与观察(1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。(2)观察：每隔统计一次数目，最后选取菌落数目时的记录作为结果。三、操作提示1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌；称取土样要在旁进行，稀释样品要在旁操作。温度时间24h菌落稳定火焰火焰2．做标记：对和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按照的顺序将试管排列成行。3．制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先，以便提高工作效率。四、菌种鉴定1．原理：分解尿素的细菌合成的将尿素分解成氨，使培养基的碱性。2．方法：在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂培养细菌，若指示剂变，可确定该种细菌能够分解尿素。平板稀释度递增规划时间脲酶增强尿素酚红红1．尿素能被尿素分解菌分解的原因是什么？2．筛选菌落和统计菌落数目的方法及对照实验的设计方法是什么？3．如何利用选择培养基分离细菌？4．样品如何进行稀释？如何测定分解尿素的细菌数量？5．脲酶的检测方法是什么？探究点一筛选微生物的研究思路[共研探究]1．筛选菌株分析下表所示培养基的配方，回答下列问题：成分含量成分含量KH2PO41.4g葡萄糖10.0gNa2HPO42.1g尿素1.0gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是，提供氮源的物质是。葡萄糖尿素(2)该培养基是否具有选择作用，为什么？提示：是。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，本培养基以尿素为唯一氮源，可以分离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。2．统计菌落数目(1)为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。(2)要设置对照实验，且一定要涂布至少个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。(3)用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。(4)活菌数的计算方法(公式)：每克样品中的菌株数＝。C表示某一稀释度下平板上生长的；V表示涂布平板时所用的稀释液的体积；M表示。30～300一个平均菌落数稀释倍数3低(C÷V)×M3．设置对照教材P22～23提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？提示：方案一：其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A同学操作无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。[总结升华]1．微生物的筛选(1)选择培养微生物的两种方法①可利用该分离对象对某种营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，并且使该营养物质成为培养基中某类基本营养物质的唯一供给者。如筛选能分解尿素的细菌，就可将尿素作为培养基中的唯一氮源。②可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培养后，其他微生物生长受到抑制，而该分离对象却可乘...
