小儿哮喘与树突状细胞免疫分子表达异常关系研究分析 医学专业VIP免费

小儿哮喘与树突状细胞免疫分子表达异常关系研究目的比较哮喘患儿与正常DCs表达协同刺激分子(B7-1和B7-2)和主要组织相容性复合体分子(MHCⅠ和Ⅱ类分子)的水平，研究小儿哮喘的免疫学发生机制。方法分离DCs，采用酶免疫标记技术分别检测并比较各组DCs协同刺激分子（B7-1和B7-2）、主要组织相容性复合体分子（MHCⅠ和Ⅱ类分子）表达率。结果DCs细胞表面B7-1表达率在哮喘组高于对照组，分别为26.02±7.26%和18.17±5.21%，差异具有显著性（p<0.05）；而哮喘组DCs表面B7-2表达率低于对照组分别为9.22±2.15%和16.18±3.81%，差异具有显著性(p>0.05)。DCs表面MHC-Ⅰ分子表达率在小儿哮喘组和对照组分别为52.02±12.18%和58.62±9.26%，差异不具有显著性（p>0.05）；DCs表面MHC-Ⅱ表达率在小儿哮喘组和对照组分别为56.26±8.37%和61.08±11.95%，差异不具有显著性(p>0.05)。结论小儿哮喘的免疫学发生机制与DCs协同刺激分子表达功能异常密切相关。关键词小儿哮喘，DCs，协同刺激分子，主要组织相容性复合体StudyontheRelationshipBetweenAsthmainchildrenandtheImmuno-molecularAbnormalExpressionsofDCsABSTRACTObjectiveBycomparingthedifferentexpressionsofimmuno-molecularsofDCsbetweenasthmainchildrenandcontrol,sotostudytheimmunemechanismofasthmainchildren.MethodsDCswereisolatedfromallthesurveys,immunelabletechniquewereperformedtodetectedtheexpressioonsofco-stimulatorymoleculesandMHCmoleculesonthesurfaceofDCs.ResultsTheexpressionofB7-1onDCsfromasthmainchildrenwashigherthanthatfromcontrolgroup,theywere26.02±7.26%and18.17±5.21%respectively,whiletheexpressionofB7-2wasseenareversetendency,9.22±2.15%and16.18±3.81%，respectively.TheexpressionratesofMHCImoleculeonthesurfaceofDCsfromasthmainchildrenandcontrolgroupwere52.02±12.18%and58.62±9.26%respectively,andthedifferencehasnostatisticalmeaning.AboutMHCmolecule,itwasseenthesameresultbetweenthe2Ⅱgroups,andtheexpressionratesofasthmainchildrenandcontrolgroupwere56.26±8.37%and61.08±11.95%respectively.ConclusionsTheimmunemechanismofasthmainchildrenwasrelatedtotheabomormalexpressionofimmuno-molecularsofDCs.Keywordsasthmainchildren,co-stimulatorymolecular,majorhistocompatibilitycomplex.1材料与方法1.1一般临床资料2008年2月-2009年1月我院儿科门诊经临床确诊为哮喘患者108例为实验组，年龄5±1.2岁；选择同期正常儿童120例为对照组，年龄5±1.5岁。1.2材料鼠抗人CD1α单克隆抗体、（华美生物工程公司），羊抗鼠二抗、B7单克隆抗体、MHC分子单克隆抗体（北京中山生物技术有限公司），淋巴细胞分离液（军事医学科学院），T淋巴细胞亚群检测试剂盒（北京邦定泰克生物技术公司）。1.3DCs分离无菌采集人外周抗凝全血，转移至含有等量淋巴细胞分离液的试管中，1000rpm离心20分钟，将淋巴细胞分离层细胞移至另一无菌试管，加入Hank’s液后1000rpm离心15分钟，弃去上清，以微量RPMI1640完全培养基混悬沉淀细胞，调细胞浓度至1×108/ml，37℃5%CO2培养4小时，弃去上清，用细胞培养液洗去未贴壁细胞，再加入含10%胎牛血清的完全细胞培养基，同时以终浓度分别为100u/ml和200u/ml加入GM-CSF和TNF-α，于培养2天后备用[1]。1.4DCs表达协同刺激分子（B7-1和B7-2）检测1.4.1取上述细胞悬液涂于洁净玻片（每一标本分别于玻片两端滴加一滴），用吹风机快速吹干，滴加固定液于标本，固定1分钟后用Hank’s液冲洗3遍，甩干。1.4.2分别于两端加入鼠抗人B7-1和B7-2单克隆抗体20ul，置湿盒37℃作用1小时。尔后用Hank’s液冲洗3遍。1.4.3加羊抗鼠IgG二抗10ul于标本，置湿盒37℃作用30分钟，再用Hank’s液冲洗3遍。1.4.4.加入APAAP复合物10ul，置湿盒37℃作用30分钟，用Hank’s液冲洗3遍。1.4.5滴加碱性磷酸酶底物显色：取少许坚固红加入底物液中，充分混匀。取上述溶液20ul加于标本上，37℃作用1小时用Hank’s液冲洗终止反应。1.4.6滴加苏木素一滴复染1分钟，Hank’s液冲洗...