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外周血循环肿瘤DNA在结直肠癌中应用价值的探索研究分析 临床医学专业VIP免费

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外周血循环肿瘤DNA在结直肠癌中应用价值的探索研究ExploringthevalueofperipheralbloodcirculatingtumorDNAincolorectalcancer目录中英文缩略词注释1中文摘要3英文摘要5引言8第一部分基于qPCR的ctDNA检测KRAS突变在结直肠癌中的应用研究材料和方法14结果20讨论30结论33参考文献34第二部分基于二代测序的ctDNA检测在结直肠癌伴肝转移的应用研究材料和方法37结果55讨论65结论67参考文献68英文缩略词注释缩略词英文全称中文全称CRCcolorectalcancer结直肠癌CEAcarcinoembryonicantigen癌胚抗原ctDNAcirculatingtumorDNA循环肿瘤核酸cfNAcellfreenucleicacid无细胞的核酸cfDNAcirculatingfreeDNA循环游离核酸PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应RT-PCRreversetranscriptionPCR逆转录PCRdPCRdigitalPCR数字PCRARMSamplificationrefractorymutationsystem突变扩增阻滞系统BEAMingbeads,emulsions,amplificationandmagnetics流式技术的磁珠乳液扩增方法ddPCRdropletdigitalPCR数字液滴PCRNGSnextgenerationsequencing第二代测序技术TAM-Seqtagged-amplicondeepsequending标记扩增深度测序技术CAPP-Seqcancerpersonalizedprofilingbydeepsequencing肿瘤个体化分析深度测序法EGFRepidermalgrowthfactorreceptor表皮生长因子受体KRASkirstenratsarcomaviraloncogene鼠类肉瘤病毒癌基因NCCNNationalComprehensiveCancerNetwork美国国立综合癌症网络mCRCmetastaticcolorectalcancer转移性结直肠癌NRASNeuroblastomaRASviraloncogenehomolog神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物BRAFv-rafmurinesarcomaviraloncogenehomologB1鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1PIK3CAPhosphotylinosital3kinase磷酸肌醇3激酶AJCCAmericanJointCommitteeOnCancer美国抗癌联合会TNMtumor;node;metastasis肿瘤分期模型qPCRquantitativereal-timePCR实时定量PCRMRDminimalresidualdisease最小残留病灶RFSrelapsefreesurvival无复发生存期CTCcirculatingtumorcells循环肿瘤细胞EMTepithelial-mesenchymaltransition上皮间质转变EpCAMepithelialcelladhesionmolecule上皮细胞黏附分子FDAfoodanddrugAdministration食品药品监督管理局PFSprogression-freesurvival无进展生存期OSoverallsurvival总生存期DFSdisease-freesurvival无病生存期PET-CTpositronemissiontomography-computedtomography正电子发射计算机断层显像LARClocaladvancedrectalcancer局部进展期直肠癌中文摘要研究目的:结直肠癌(colorectalcancer,CRC)早期、精准诊疗是临床面临的新挑战。传统上,肿瘤诊断是以组织标本提供的病理学为金标准,但在获取组织活检时存在有创操作的风险、无法获取肿瘤组织的困难。而以循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA,ctDNA)为代表的液体活检给临床诊治带来了新的希望。ctDNA的检测具有易获取、可重复采集、相对无创、敏感度及特异度较高的优点。目前主要的检测途径分为两大类,一类为基于PCR的途径,另一类是基于基因测序的途径。本研究我们通过使用基于PCR和基因测序的ctDNA检测技术,寻找CRC患者外周血ctDNA中KRAS突变规律与临床病理特征的相关性,以及与肿瘤组织中KRAS突变的一致性。进一步了解CRC伴肝转移患者ctDNA基因表达情况及其临床意义。研究方法:1.用基于qPCR的super-ARMS方法对95例AJCC分期为I-IV期的CRC患者ctDNA进行检测,评价组织突变、外周血ctDNA突变与临床病理特征之间的相关性,并通过评价组织中与ctDNA中KARS基因突变的一致性,来探索ctDNA在CRC患者中的应用价值。2.通过基于二代测序的方法,对20例结直肠癌伴肝转移的患者的组织标本,术前术后的ctDNA进行检测和分析,探讨组织和ctDNA基因突变的表达情况和相关的临床意义。研究结果:1.组织KRAS基因突变与临床特征如年龄、性别、肿瘤家族史、是否吸烟、部位、血清CEA、TNM分期等因素无明显相关性。2.血浆ctDNA的KRAS基因突变和M分期相关(p<0.05),说明有远处转移患者突变率更高。3.ctDNA与组织的KRAS一致性检验提示两者的总体kappa=0.34;进一步亚组分析中可以看到,年龄<60岁组、有肿瘤家族史、有淋巴结转移和远处转移、神经侵犯、脉管浸润...

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