课题课题22土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离与计数一、土壤中分解尿素的细菌的分离方法一、土壤中分解尿素的细菌的分离方法1、从自然环境中筛选细菌的原理：根据它对生存环境的需求，从相应环境筛选2、实验室筛选用选择培养基筛选原理：改变培养基成分或条件，利于目的菌株的生长，抑制其他微生物生长一、土壤中分解尿素的细菌的分离方法一、土壤中分解尿素的细菌的分离方法3、筛选方法分解石油的细菌：耐盐细菌：抗青霉素细菌：自养微生物：石油为唯一碳源培养基高浓度食盐培养基加青霉素培养基无碳源培养基尿素为唯一氮源的选择培养基4、其它举例二、细菌的计数方法二、细菌的计数方法————活菌计数法活菌计数法1、显微镜直接计数法：显微镜、血球记数板2、稀释涂布平板法：间接记数法；菌落数代表细菌数在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个细菌繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个细菌。每克（ml）样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。⑵计算方法：⑴原理：①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数，至少2个平板菌落数相近。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。2个或多个活菌形成一个菌落三、如何设置对照？1、排除土壤不同：其他同学用同样的土壤进行实验对照2、排除杂菌污染：未接种土壤菌悬液的相同培养基（空白对照）3、排除混入其他氮源：接种土壤菌悬液蛋白胨牛肉膏（其他氮源）培养基三、如何设置对照？基本（完全、通用）培养基（牛肉膏蛋白胨培养基））接种后培养观察菌落数目。菌落数明显多于选择培养基。思考1判断选择培养基是否具有筛选作用对照组应如何设置？实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。原因：⑴土样不同，⑵培养基污染(3)培养基混入了其他的含氮物质)四、操作步骤四、操作步骤11、土壤取样、土壤取样22、样品稀释、样品稀释33、涂布平板、涂布平板44、培养与观察、培养与观察55、菌落计数、菌落计数四四、操作步骤、操作步骤多数多数细菌适宜在酸度接近细菌适宜在酸度接近中性中性的的潮湿潮湿土壤土壤中生长中生长,,有利于有利于筛选筛选细菌。细菌。铲去土壤表层目的铲去土壤表层目的::从从肥沃、湿润肥沃、湿润的土壤的土壤((天然培养基）中取样。天然培养基）中取样。先铲去表层土先铲去表层土3-8cm3-8cm左右，再取样，将样品左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。装入事先准备好的信封中。11、土壤取样、土壤取样22、样品稀释、样品稀释四四、操作步骤、操作步骤土壤菌悬液进行土壤菌悬液进行梯度稀释梯度稀释；通常；通常选选用一定稀释范围用一定稀释范围的样品进行培养，以的样品进行培养，以保证获得菌落数在保证获得菌落数在3030～～300300之间、适之间、适于计数的平板。于计数的平板。◆应在火焰旁称取土壤10g。◆用无菌水稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行◆分离不同的微生物采用不同的稀释度33、涂布平板、涂布平板从稀释倍数为从稀释倍数为101044～～101066稀释液中依次取样，稀释液中依次取样，每次吸取每次吸取0.1mL0.1mL进行平板涂布操作，每种进行平板涂布操作，每种稀释液至少涂布稀释液至少涂布33个平板（选择培养基）。个平板（选择培养基）。四四、操作步骤、操作步骤◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。44、微生物的培养与观察、微生物的培养与观察细菌：细菌：放线菌：放线菌：霉菌：霉菌：①①培养温度及时间培养温度及时间②②观察观察四四、操作...
