目 录 一、层析柱的装填 1. 装填前的准备工作 a. 装填的一般考虑 b. 小颗粒的去除 c. 缓冲液平衡 d. 匀浆准备 2. 装填步骤 a. 恒流速/半恒压装填法 b. 可供选择的装填方法 3. 平衡与柱效评价 二、层析柱的操作 1. 柱层析 a. 分子尺寸排阻层析（SEC） b. 离子交换层析（IEC） c. 疏水反应层析（HIC） d. 亲和层析（AFC） 2. 填料的清洗 3. 填料的保存 4. 灭菌/热原的去除/防腐剂的清除/柱筛板 1 1 1 1 2 2 3 4 5 6 7 7 7 8 8 8 9 1 0 1 0 层析工艺树脂填料TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW的装填指南关于TOYOPEARL 和TSK-GEL 5PW 的简介 TOYOPEARL 和TSK-GEL 5PW大孔树脂型填料应用于生物分子层析工艺，非常适合实验室和工业级大规模生产中球状蛋白、多肽、核酸以及其他生化衍生物的分离纯化。这种树脂型填料为改性的聚甲基丙烯酸酯，由于醚及羟基的存在使其具有亲水性的表面，并且具有了更好的耐压性能、流动特性及pH 稳定性。 一、层析柱的装填 图 1. 装填所需要的装置 1. 装填前的准备工作 a. TOYOPEARL 和TSK-GEL 5PW 装填的一般考虑 TOYOPEARL的 装 填压 力 最 好 为0.5~3bar（7~45psi）；TSK-GEL 5PW的装填压力最好为3~10bar （ 45~140psi ）。 尽 管 TOYOPEARL 和TSK-GEL 5PW填料也可以通过重力沉降法进行装填，但这并不值得提倡。TOYOPEARL 的装填压力不应过高（<5bar），TSK-GEL 5PW 的装填压力不应超过 20 bar。 成功装填TOYOPEARL 和TSK-GEL 5PW 所需要的设备有（参照图 1）：泵（HPLC 或蠕动泵）、压力表、水平仪、玻璃/聚丙烯酸/PEEK 或不锈钢层析柱、储槽（可选）等。 b. 小颗粒的去除（我们建议最好去除小颗粒） 在匀浆后的胶体中所存在的小颗粒会阻塞筛板或烧结板，最终会导致整个柱子的压降增大。通过下列过程可将匀浆后胶体中所存在的小颗粒去除。 （1）通过一根搅拌棒或桨激烈搅拌包装容器内的树脂填料，将其搅拌成悬浮液（请不要使用磁力搅拌器，这会磨碎树脂填料并产生小颗粒）。一旦成为悬浮液后，立刻将需要量的悬浮液（大概4 体积的悬浮液=3体积的树脂填料）倒入某个容器内，容器的体积应不小于需要装柱填料体积的 4 倍。加入蒸馏水或者缓冲液至 4 倍填料体积，并一直保持搅拌。 （2）静置匀浆液 静置时间取决于容器的直径、匀浆溶剂和填料的粒径大小。TOYOPEARL 和TSK-GEL 5PW 填料用水匀浆时，平均静置...
