斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的克隆与表达VIP免费

盛晔等：斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的克隆、表达与启动子活性分析 / 微生物学报1 斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的克隆、表达与启动子活性分析盛晔1.2，闵丹1.2，李轶女2，张志芳2，朱越雄1，朱 江1(1.苏州大学医学部基础医学与生物科学学院，江苏苏州 215123 2. 中国农业科学院生物技术研究所，北京100081)摘要 : 【目的】研究斜纹夜蛾核型多角体病毒II ORF146 基因的结构与功能。 【方法】根据 SpltMNPV II ORF146基因序列设计引物，经 PCR 扩增克隆 ORF146 基因。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建 ORF146 片段的原核表达载体，表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明，读码框含1383 bp，编码 460 个氨基酸的蛋白质，推定分子量为50.4 kD 。启动子活性分析和转录时相分析都表明该基因是个早、晚期都表达的基因，在病毒感染8h 和 18h 有两个转录峰，24h 以后转录水平略有下降， 但趋于稳定。 pET-28a-ORF13 原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高，效价可达1:3200 以上。【结论】 SpltMNPV II ORF146 基因是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因。推测 ORF146 基因可能与SpltMNPV II病毒感染宿主细胞后病毒 DNA 复制有关。制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能。关键词 : 斜纹夜蛾；核型多角体病毒；ORF146基因；原核表达；多克隆抗体中图分类号 : Q933文献标识码 :A 文章编号 :0001（6209）斜纹夜蛾 (Spodoptera litura ，Spli) 又名莲纹夜蛾，俗称夜盗虫[1] ，属鳞翅目夜蛾科的一种杂食性重要农业和林业害虫，危害植物共计109科389种，中国、日本、朝鲜、印度以及东南亚地区经常造成严重危害和巨大经济损失[2,3] 。由于斜纹夜蛾的食性杂、世代重叠、抗性强，因此防治难度高， 在各种化学合成杀虫剂严重污染环境以及害虫对化学合成杀虫剂抗性日益增强的情况下，生物防治愈显重要和迫切[4]。包括中国在内的各国学者，长期致力于发展核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus ，NPV ）生物杀虫剂来防治农业和森林害虫。斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus ，SpltMNPV ）作为商品化杀虫剂已在我国一些地方推广使用，但杀虫作用的迟效性，宿主域窄等缺点是发展NPV 生物杀虫剂的主要障碍，一些研究正试图通过分子生物学和...