激光共聚焦显微镜技术 The techniques and applications of Confocal Laser Scanning Microscopy 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 1957 年，Marvin Minsky 提出了共聚焦显微镜技术的某些基本原理，获得了美国的专利。 1978 年，阿姆斯特丹大学的G.J.Brakenhoff 首次展示了改善了分辨率的共焦显微镜。 1985 年，Wijnaendtsvan Resandt 推出了第一台对荧光标记的材料进行光切的共焦显微镜 激光共聚焦显微镜(LSCM)的发展简史 80 年代末，各家公司都推出了商品化的共焦显微镜,英国的Bio-Rad公司的MRC 系列，德国Leica 公司的TCS 系列，Zeiss 公司的LSM 系列等。 近二十年来，从滤片型到光谱型，人们对共焦高分辨率，采集图像快速，技术的改进及应用开发不断进行，出现了很多新的技术。如双光子，FCS,FLIM ,STED 等。 共焦显微镜的优点 人眼分辨率： 0.2mm 光学显微镜分辨率：0.25μ m 电子显微镜分辨率：0.2nm 共焦显微镜分辨率：0.18μ m 共焦显微镜的优点 电子显微镜的缺陷： 1.只能观察固定样品 2.样品制备过程（固定、包埋、切片）造成的假象 荧光显微镜的缺陷: 1.可以观察活细胞或组织，但细胞或组织内结构高度重叠。 2.荧光具有强散射性，造成图像实际清晰度的大大下降。 3.荧光漂白很快，使荧光图像的拍照有困难。 4.如果荧光滤片选配不当，多荧光标记样品图像的采集很困难，且很难抑制光谱交叉。 共焦显微镜的优点 共焦显微镜与传统显微镜的区别 1.抑制图像的模糊，获得清晰的图像 激光扫描共焦显微镜技术 共焦显微镜与传统显微镜的区别 2. 具有更高的轴向分辨率，并可获取连续光学切片 激光扫描共焦显微镜技术 共焦显微镜与传统显微镜的区别 3. 增加侧向分辨率 激光扫描共焦显微镜技术 Flu orescent Microscope v s confocal 激光扫描共焦显微镜技术 激光扫描共焦显微镜技术 扫描方式 激光扫描共焦显微镜技术 原理小结: Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔内，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即为共焦点，被探测点所在的平面即为共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像...
