第一章 细胞生物学绪论 细胞生物学概念:是从细胞的显微、亚显微和分子三个水平对细胞的各种生命活动开展研究的科学。 细胞生物学的研究对象:以细胞为研究对象。 细胞生物学的研究方式:①从细胞的表型特征入手,探索隐藏在其背后的分子机制②从基因或蛋白质等生物大分子入手,了解其对细胞功能或行为的影响。故而细胞生物学也被称为细胞分子生物学或分子细胞生物学。 细胞生物学发展的几个主要阶段:①细胞的发现与细胞学说的创立②光学显微镜下的细胞学研究③实验细胞学阶段④亚显微结构域分子水平的细胞生物学 细胞学说: ①‘一切生物,从单细胞生物到高等动物和植物均由细胞组成,细胞是生物形态结构和功能活动的基本单位。’②‘一切细胞只能来自原来的细胞。’ 第三章 细胞生物学的研究方法 光学显微镜分辨率及公式: ①显微镜或人眼在 25cm 的眀视距离处,能分辨被检物体微细结构最小间隔的距离,普通光学显微镜的分辨极限是 0.2μm ②分辨率公式:R=0.61λ/n .sin n=聚光镜和物镜之间介质的折射率,空气为 1,油为 1.5 =标本对物镜镜口张角的半角,sin 的最大值为 1 λ=照明光源的波长,白光 0.5μm 生物样品制备的过程: ①固定:可使生物大分子交联,蛋白质成分凝固,防止细胞自溶和破坏而产生人工假象。常用固定剂:甲醛、戊二醛、乙醇 ②包埋:使组织形成硬块,防止样品移位,便于切片。常用包埋剂:石蜡、树脂 ③切片:切成 1~10μm 的薄片 ④选择性染色:增大反差 荧光:细胞中的某些物质(如叶绿素)经紫外线照射后能发出可见光线,称为荧光。 自发荧光:由细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光。 诱发荧光:一些细胞成分本身经紫外线照射后不发荧光,但用荧光染料(酸性品红、甲基绿、吖叮橙等荧光色素)进行活体染色或固定后切片染色,就能在荧光镜下看见荧光,这种荧光叫诱发荧光。 共聚焦的概念:是指物镜和聚光镜互相共焦点,亦即两者同时聚焦到一个点,保证了只有从标本焦面出发的光线聚焦成像,焦面以外的漫射光不参加成像,大大提高了分辨率,使图像更加清晰。 透射电镜标本制备过程: ①取材:尽可能保持生活状态,避免损伤必须耐真空由于电子穿透力弱,标本必须超薄标本反差应尽可能大(生物材料原子系数低,图像反差差,不易出现明暗差别) ②固定:为防止生物样品在死亡后和脱水过程中产生结构改变,离体生物标本迅速固定。常用戊二醛和四氧化锇固定戊二醛在蛋白...