WESTERN 液体配方v1.0 2005-11-8 [常用buffer] 1. PBS(1000ml PH7.4) KCl 0.2g KH2PO4 0.2g NaCl 8.0g Na2HPO4.2H2O 1.15g 加ddH2O 定容至1000ml 常温保存 2.1×DHank’s(1000ml PH7.0~7.2 ) KCl 0.4g NaCl 8.00g Na2HPO4.12H2O 0.156g KH2PO4 0.06g NaHCO3 0.35g (如需要可加酚红 0.02g) 加ddH2O至1000ml 4oC保存6 个月 10×DHank’s(500ml ) KCl 2.00g NaCl 4000g Na2HPO4.12H2O 0.779g KH2PO4 0.30g NaHCO3 1.75g 加ddH2O至500ml 4oC保存6 个月 3.TBS(1000ml PH 7.6) Tris base (121.1) 10mM 1.211g NaCl(58.44) 150mM 8.766g ddH2O 800ml 加浓盐酸约 10-17 滴 调 PH 至7.6,定容至1000ml 常温保存 4.TBST TBS 临用加0.05%Tw een20 4oC保存 15.电泳缓冲液 (1000ml PH8.3) K:SDS粉末很轻,称量时易被吸入口鼻腔内,非常难受,操作时最好带口罩眼镜防护。 s:甘氨酸、甲醇用量比较大,买大包装合算 Tris base 3.03g 甘氨酸 14.4g SDS 1g 定容至 1000ml 4oC保存 1 周 6.电转缓冲液(1000ml PH 8.3-8.4) Tris base 5.82g 甘氨酸 2.93g SDS 0.37g 甲醇 200ml 加ddH2O定容至 1000ml 4oC保存 1 周 2[备用液] 1. 30%丙稀酰胺储备液(100m l) 丙稀酰胺(acrylamide)有毒 29.0g N,N’-甲叉双丙稀酰胺(N,N’-methylenebisacrylamide)有毒 1.0g ddH2O 60ml 37oC溶解(有的配方需要溶解18hr以上),定容至100ml, 滤纸过滤 棕色瓶 4oC保存一个月(实践表明常温保存2~3 个月亦可) 2.分离胶缓冲液1.5M Tris.HCl 缓冲液 PH8.8(100ml) Tris base 18.17g ddH2O 80ml 搅拌混匀后,加入浓盐酸约3.5ml,调PH 至8.8,定容至100ml 4oC保存 3.浓缩胶缓冲液1M Tris.HCl 缓冲液 PH6.8(100ml) Tris base 12.11g ddH2O 70ml 搅拌混匀后,加入浓盐酸约7ml,调PH 至6.8,定容至100ml 4oC保存 4.10%SDS 溶液(100ml) SDS(十二烷基黄酸钠) 10g ddH2O 80ml 68oC助溶,定容至100ml 常温保存 5.2×SDS 上样缓冲液(loading buffer) s:用2-ME 更省钱 0.5M Tris.HCl PH6.8 2.5ml SDS 0.4g DTT 或 2-ME(β 巯基乙醇) 0.31g/0.2ml 甘油 2ml 溴酚蓝 0.1mg 加ddH2O 定容至10ml 分装 1ml,100μl/支,-20oC保存 6.5×SDS 上样缓冲液(loading buffer) 1M Tris.HCl...