课题 3 血红蛋白的提取和分离一、学习目标：本课题尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法， 电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。二、重点：凝胶色谱法的原理和方法三、难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。【基础梳理】一、凝胶色谱法1、概念：也称做；是根据分离蛋白质的有效方法。2、原理（1）由构成的凝胶，内部有许多贯穿的的。（2）当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，从而使不同的蛋白质分子得以分离。二、缓冲溶液1、作用：在一定范围内，抵制的对溶液 pH 的影响，维持pH 。2、配制：由种缓冲剂溶解于中配制而成， 通过调节缓冲剂的就可以得到不同pH 范围内使用的缓冲液。三、电泳1、概念：指在电厂的作用下发生的过程。2、原理：在一定的下，、等生物大分子的可解离基团会带上或，在的作用下， 这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子的差异及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中的 分离。4、方法： 常用的电泳方法有和。测定蛋白质分子量时通常使用。四、实验操作1、样品处理 :通过、、等操作收集血红蛋白溶液。(1)红细胞的洗涤：目的是。分离时采取，直至上清液中没有，表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋 白的释放：在和的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：把离心后，将试管中的液体用过滤、除 去，于中静置片刻后，分离出下层的。2、粗分离：即透析(1)方法：将血红蛋白溶液装入，将放入一定量适宜浓度的中，透析。(2)目的：将的杂质除去。(3)原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。3、纯化 :通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下：(1)凝胶色谱柱的制作。(2)凝胶色谱柱的装填①材料：本实验使用的是。②方法： 凝胶用充分溶胀后。 配成，一次性倒人色谱柱内。不能有存在；不能发生流干露出凝胶颗粒的现象。(3)样品的加入和洗脱①a、准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的缓慢下降到与平齐，关闭出口。b、加样：用小心地将1mL 透析后的样品加到的顶端，注意不要破坏。c、加样后：打开下端出口，使样品渗入内。...
