1 山西梁汾醋业有限公司文件类别及编号：LF-GC-01 版次共页第页菌落总数测定标准操作规程制订年份：年制订人：审核人：批准人：制订日期：审核日期：批准日期：颁发部门：分发部门：生效日期：菌落总数测定的标准操作规程1. 目的规范山西老陈醋 菌落总数 测定的操作规程，保证山西老陈醋产品的质量。2. 适用范围酿造食醋和配制食醋 菌落总数的测定 。3. 仪器设备恒温培养箱，冰箱，恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器，振荡器；无菌吸管1ml(0.01 刻度 )、10ml(0.1ml 刻度)或微量移液器及吸头； 无菌锥型瓶，250ml/500ml; 无菌培养皿：直径90mm；PH 计或精密 PH 试纸；放大镜或菌落计数器4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基，成分：胰蛋白胨5.0g 酵母浸膏2.5g 葡萄糖1.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml PH7.0±0.2 制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH。分装试管或锥型瓶， 121℃高压灭菌 15min。4.2 磷酸盐缓冲液2 成分：磷酸二氢钾（ KH2PO4） 34.0g 蒸馏水500ml PH 7.2 制法：贮存液：称取 34.0g 磷酸二氢钾溶于500ml 蒸馏水中，用大约175ml 的 1mol/L氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至 1000ml 存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml,分装于适宜容器中， 121 摄氏度高压灭菌 15 分钟。4.3 无菌生理盐水成分：氯化钠8.5g 蒸馏水1000ml 制法： 8.5 克氯化钠溶于 100ml 蒸馏水中 121 摄氏度高压灭菌 15 分钟。5 检验程序3 6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品： 称取 25 g 样品置盛有 225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1min～2min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）报告计数各平板菌落数计算菌落总数培养每皿中加入 15ml-20ml 平板计数琼脂培养基，混匀检样25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质10 倍系列稀释选择 2-3 个适宜稀释度的样品均液，各取 1ml 分别加入无菌培养皿内4 中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。6.1.3 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），...
