百度文库- 让每个人平等地提升自我11 实验十四血清胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）胆固醇的测定方法很多；通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。化学试剂比色法中有直接法和间接法；前者可用血清直接测定， 后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。【目的 】1．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。2. 掌握血清胆固醇测定的临床意义。【原理 】血清中总胆固醇 （TC）包括胆固醇酯 (CE) 和游离型胆固醇(FC), 酯型占 70%，游离型占30%。胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（ COD）的作用下氧化生成Δ4- 胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（POD）催化氢与4- 氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下：胆固醇酯胆固醇 ＋ 脂肪酸CEH胆固醇 ＋ O2△4- 胆甾烯酮 ＋ H2O2COD2H2 O2 ＋ 4- 氨基安替比林 ＋ 酚红色醌亚胺POD【器材 】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。【试剂 】酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为：磷酸盐缓冲液 50mmol/L 胆固醇酯酶≥ 200U/L 胆固醇氧化酶≥ 100U/L 过氧化物酶≥ 3 000U/L 百度文库- 让每个人平等地提升自我22 4- 氨基安替比林 mmol/L 苯酚 5 mmol/L 此外还含有胆酸钠和Triton X-100，胆酸钠是胆固醇酯酶的激活剂，表面活性剂Triton X-100能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯，有利于胆固醇酯的水解。2． mmol/L （200mg /dl ）胆固醇标准液精确称取胆固醇 200mg 溶于无水乙醇， 移入 100ml 容量瓶中， 用无水乙醇稀释至刻度( 也可用异丙醇等配制) 。【操作 】取试管 3 支，编号，按下操作。表 3-15 酶法测定血清胆固醇操作步骤加入物（ ml）测定管标准管空白管血清－－胆固醇标准液－－蒸馏水－－酶应用液混匀后， 37℃水浴保温15 分钟，在 500nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。【计算】血清胆固醇 (mmol/L) ＝ 测定管吸光度标准管吸光度× 5.17【注意事项】1. 黄疸血...
