过氧化物酶（ POD）活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的 4- 邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。【实验试剂】愈创木酚、 30%过氧化氢、 20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（ pH6.0）、反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲液（ Ph6.0 ）50mL，加入愈创木酚28uL, 加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢 19uL，混合均匀保存在冰箱中] 【方法步骤】（1）、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g ，加 20mmol/LKH2PO4 2.5mL，于研钵中研成匀浆，以4000r/min离心 10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液 ( 酶活性过高，稀释10 倍 ) 。（2）、酶活性的测定取试管 3 只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液 3mL，稀释后的酶液1mL（如表 1），立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔 1min 读数一次（ 4min）。以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD值增加 0.01 定义为一个活力单位。表 1 紫外吸收法测定POD酶活性配置表管号S0（对照）S1（实验）S2（实验）反应混合液 (ml) 3.0 3.0 3.0 KH2PO4 (ml) 1.0 0.0 0.0 酶液 (ml) 0.0 1.0 1.0 4.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以Δ A 470 /[min · g （鲜重） ] 表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。POD总活性 [u/g(FW)]= 式中： POD总活性以酶单位每克鲜重表示。其中△470=ACK-AE 比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。ACK ——照光对照管的吸光度。AE ——样品管的吸光度。Vt ——样品液总体积，mL。FWtV.VAT1470010V1 ——测定时样品用量，mL。W——样品鲜重，g。蛋白质含量单位为mg/g。过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法【原理】H2O2 在 240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A 240) 随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【试剂】0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液：取A 液 91.5ml ，B 液 8.5ml, 充分混合。0.1mol/L H2O2以 30%的过氧化氢稀释(30*1.1g/34.01)mol/100ml=9.7mol/L,取 0.52ml 30%的过氧化氢稀释到50ml....
