北京泰普舜康医学检验所作业指导书编号：BJTIB-SOP-PCR064人巨细胞病毒核酸定量检测标准操作规程（荧光PCR法）第一版第1页共8页第0次修改人巨细胞病毒核酸定量核酸检测标准操作规程（荧光PCR法）1.目的规范人巨细胞病毒(HCMV)核酸DNA（荧光PCR法）检测操作流程，准确进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA分析。2.应用范围使用中山大学达安基因股份有限公司人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒（荧光PCR法）和PE GeneAmp 5700、ABI Prism 7000、ABI Prism 7700等仪器进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA检测。3.职责由PCR实验室制定程序文件，专业技术人员负责执行，实验室主管负责监督实施。4.内容 4.1 实验原理和临床应用本品选取人巨细胞病毒珠（即人疱疹病毒5型）-AD169基因组中编码即刻早期转录调节蛋白的IE1基因的一高度保守的非编码区为扩增靶区域，设计特异性引物及荧光探针，扩增片段长度为86bp,利用实时荧光定量PCR技术，定量检测尿液、乳汁、血清或淋巴细胞样本中人巨细胞病毒DNA。本品用于器官移植、骨髓移植及HIV阳性/AIDS患者尿液、乳汁、血清或淋巴细胞中的人巨细胞病毒(HCMV)感染的检测，用于人巨细胞病毒感染的辅助诊断和疗效监控，不用于血源筛查。本品检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。4.2标本采集4.2.1 使用标本类型：尿液、乳汁、血清和淋巴细胞4.2.2 标本采集；由合作单位按照以下要求进行采集。4.2.2.1 尿或乳汁：取晨尿或成熟乳1ml于1.5ml的无菌离心管中，离心取沉淀即为标本。标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。4.2.2.2 血清：用无菌注射器抽取受检者静脉血1ml,注入无菌1.5mlEppendoff管，4℃静置过夜。吸取上层血清（注意勿带入红细胞）至另一无菌1.5mlEppendoff管中，即为血清标本。标本可立即用于测试（48小时以内），也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。北京泰普舜康医学检验所作业指导书编号：BJTIB-SOP-PCR064人巨细胞病毒核酸定量检测标准操作规程（荧光PCR法）第一版第2页共8页第0次修改4.2.2.3 淋巴细胞：取静脉血（EDTA抗凝）1ml,利用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞即为标本。标本可立即用于测试，也可保存于4℃待测，保存期为24小时。4.3 试剂准备4.3.1 供应商：中山大学达安基因股份有限公司4.3.2 此实验试剂应放在冰箱-20℃保存，在实验前5分钟取出备用，实验后应立即放回冰箱-20℃。4.3.3 如果试剂出现了封口蜡破损导致液体外漏以及过期试剂，应及时更换。4.4...
