- 1 - 基因转导技术（1 4 周） 基因转移技术 将外源基因转移到受体菌或细胞内,在细胞内实现转入基因的扩增或表达的技术。它是重组 DNA、基因功能研究、基因治疗的关键技术之一 方式： 转化 感染 转染 转化（Transformation）：将质粒或其它外源 DNA导入处于感受态的宿主菌，并使其获得新的表型的过程 感染(Infection): λ 噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组 DNA 分子，在体外包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，然后才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增 转染(Transfection):是转化和感染两个词构成的新词，指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA 片段而获得新的遗传表型的过程。如电穿孔、磷酸钙共沉淀、脂质体等 基因敲除（knock ou t of gene）：利用基因打靶技术，用无功能的外源基因转入细胞与基因组中同源序列进行同源重组，把具有功能的同源序列置换出来，造成功能基因的缺失或失活，这一技术叫基因敲除 基因敲进（knock in of gene）：利用基因同源重组，将外源有功能的基因转入基因组中不存在或已失活的细胞中与其基因组中同源序列进行同源重组，在细胞内获得表达，这一技术称为基因敲进 统称为基因打靶技术（Gene targeting） 常规转染技术可分为两大类： 瞬时转染：外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析 稳定转染：也称永久转染，外源 DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。外源 DNA 整合到染色体中概率很小，大约1/104 转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，新霉素抗性基因，潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 基因转导技术的分类 化学方法： 磷酸钙沉淀法 DEAE-葡聚糖 1. 磷酸钙沉淀法 目的基因与磷酸钙等物质混合，形成沉淀的DNA 微细颗粒，吸附在细胞膜表面，由细胞内吞作用进入到靶细胞的细胞中，并整合到受体细胞基因组中，在适当条件下得以表达 方法简单，但转化效率低 Ca2(PO4)2+DNA → 混合微细颗粒 2. DEAE-葡聚糖和聚季胺盐转染法 DEAE-葡聚糖或聚季胺盐均可同带负电的DNA 分子聚合,形成复合物，与靶细胞作用而传递进入细胞内 DEAE-葡聚糖具有促进靶细胞摄取 DNA 的作用 物理方法： 脂质体介导的转染 电击转染法 基因枪技术 显...
