第三章 固定化酶与固定化细胞 第一节 概述 第二节 固定化酶的性质及其影响因素 第三节 固定化酶的制备 第四节 固定化细胞 第五节 固定化辅酶和原生质体 第六节 酶反应器和固定化酶（细胞）的应用 第一节 概述 什么是固定化酶？ 第一节 概述 二． 固定化酶的优缺点 多次使用 可以装塔连续反应 优点： 纯化简单 提高产物质量 应用范围广 缺点： 首次投入成本高 大分子底物较困难 第一节结束 点击返回 第二节 固定化酶的性质及其影响因素 一． 影响固定化酶性质的因素 二． 固定化后酶性质的变化 三． 评价固定化酶的指标 一． 影响固定化酶性质的因素 1． 酶本身的变化，主要是由于活性中心的氨基酸残基、高级结构和电荷状态等发生了变化。 二．固定化后酶性质的变化 1． 固定化对酶活性的影响： 酶活性下降，反应速度下降 2． 固定化对酶稳定性的影响 稳定性提高（原因） 3． pH 的变化（原因） 载体带负电荷，pH 向碱性方向移动。 载体带正电荷，pH 向酸性方向移动。 催化反应的产物为酸性时，固定化酶的pH 值比游离 酶的pH 值高；反之则低 固定化后酶稳定性提高的原因： a. 固定化后酶分子与载体多点连接。 b. 酶活力的释放是缓慢的。 c. 抑制自身降解，提高了酶稳定性。 PH 对酶活性的影响： （1） 改变酶的空间构象 （2）影响酶的催化基团的解离 （3）影响酶的结合基团的解离 （4）改变底物的解离状态，酶与底物不能结合或结合后不能生成产物。 4． 最适温度变化 一般与游离酶差不多，但有些会有较明显的变化。 5． 底物特异性变化 作用于低分子底物的酶 特异性没有明显变化 既可作用于低分子底物又可作用于大分子低物的酶 特异性往往会变化。 6． 米氏常数Km 的变化，Km 值随载体性质变化 （链接） 米氏常数Km 的变化，Km 值随载体性质变化 由于分配效应：ρ =[Si]微环境/[S]宏观环境 Km'=Km/ρ (表观米氏常数) （1） 载体与底物带相同电荷，Si]<[S],ρ <1,Km’>Km 固定化酶降低了酶的亲和力。 （2） 载体与底物电荷相反，静电作用，[Si]>[S]，则ρ >1,Km'
