环工综合实验血球计数板计数实验实验报告环境科学与工程学院实验中心实验题目血球计数板计数实验实验类别综合实验室实验时间实验环境温度：湿度：同组人数一、实验目的了解血球计数板的结构掌握利用血球计数板计微生物细菌数的原理和方法二、实验仪器及设备细菌及培养基：斜面仪器：血球计数板，显微镜。其它：蒸馏水，盖玻片，载玻片，无菌吸管，1OmL、5mL 移液管三、实验原理实验原理问答题：1.血球计数板计数原理是什么？如何使用血球计数板对微生物尺寸大小进行测定？答：血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格，中央的一大方格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为 16 个中方格（大方格用三线隔开），而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个计数区分成 25 个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成 16 个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由 400 个小方格组成。计数区边长为1mm，则计数区的面积为 lmm2，每个小方格的面积为 1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为 0.1mm，所以每个计数区的体积为 0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。2•血球计数板计算微生物数量的优缺点是什么？血球计数板与平板稀释法对细菌个数进行测定，结果往往差别很大。分析原因。答：⑴将细菌（或其他微生物）以染料（例如结晶紫）染色后，直接以显微镜观察的方式计数，再推算回细菌数，所得即为总菌数，即死菌、活菌一并计算。优点：简单、快速、重复性高。不足：不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄；一些小的细胞在显微镜下很难看到；样品中菌液浓度不能低于 106 个/mL；不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定⑵ 血球计数板计量时所得到的结果为死菌与活菌的总数，而平板稀释法培养得到的为活菌数目，因此结果差异较大。四、实验步骤1•稀释：取接种酵母菌的斜面一支，加入 5ml 无菌水，摇晃试管一分钟，使形成菌液；将菌液倒入洁净的 150ml 锥形瓶中，加结晶紫三滴，摇晃 2 分钟，再加入无菌水至 50ml。2•镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后...
