精品文档---下载后可任意编辑HER2/neu 联合细胞表位的预测筛选、基因克隆、表达及鉴定的开题报告一、讨论背景和意义:HER2/neu 是一种重要的跨膜受体,它是人类乳腺癌(breast cancer)细胞增殖和转移的一个重要促进因素。HER2/neu 在许多人类肿瘤中被高表达,包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌和前列腺癌等。HER2/neu 的过度表达,意味着某种程度上的恶性程度加剧,预后也变得更加不良。已有许多讨论表明,HER2/neu 基因突变和/或过度表达,是许多肿瘤的重要发病机制,预防和治疗这些肿瘤十分重要。二、讨论目的和内容:讨论目的是提取并预测 HER2/neu 联合细胞表位,通过基因克隆、表达和鉴定,使其具有生物活性,为人类乳腺癌等肿瘤的防治提供讨论基础。讨论内容主要包括以下几个方面:1.通过文献调研和实验方法,确定 HER2/neu 联合细胞表位的预测筛选方法。2.采纳 PCR 技术,进行 HER2/neu 基因的克隆。3.通过 SDS-PAGE,Western blot 等技术,检测等该基因表达情况。4.通过蛋白质含量分析,计算纯化蛋白的收率和纯度。5.应用适当的实验方法,鉴定所制备的蛋白是否具有与肿瘤细胞的结合能力等活性。三、讨论方法和步骤:1.基于文献的调研,确定 HER2/neu 联合细胞表位的预测筛选方法。2.采集肿瘤组织等样品,抽取 RNA,利用 PCR 技术,对 HER2/neu 基因进行克隆。3.将所得克隆体插入载体中,利用大肠杆菌(E.coli)进行表达。4.进行蛋白质表达后,通过 Ni-NTA 亲和层析纯化,在剪切系统中开始实施蛋白质降解产品的制备。精品文档---下载后可任意编辑5.通过 SDS-PAGE,Western blot 等技术,检测蛋白表达情况和纯度等,计算纯化蛋白的收率和纯度。6.应用适当的实验方法,确定肿瘤组织对所制得的蛋白是否具有免疫应答能力等活性。四、讨论预期成果:本讨论的预期成果包括:1.确定 HER2/neu 联合细胞表位的预测筛选方法。2.成功进行 HER2/neu 基因的克隆,表达和鉴定。3.制备出具有生物活性的蛋白,并鉴定其免疫应答能力等活性。4.为人类乳腺癌等肿瘤的防治提供有价值的讨论基础。五、讨论难点和解决方法:1.确定具有较好专属性和亲和力的 HER2/neu 联合表位的筛选和预测方法。可能需要综合使用多种分子生物学技术和信息分析平台,以增加识别准确度。2.制备过程中需要注意:会表达出多种不同的未修饰和修饰形式的蛋白,必须通过亲和纯化、薄层水平发生等技术,确保所制得的蛋白具有较高的纯度和生物活性。3.对...