人巨细胞病毒UL145及UL13基因转录特点和转录本结构研究的开题报告

精品文档---下载后可任意编辑人巨细胞病毒 UL145 及 UL13 基因转录特点和转录本结构讨论的开题报告一、讨论背景与意义人巨细胞病毒（HCMV）是致病性强、传播广泛的 β-疱疹病毒科病毒，可引起危害婴幼儿健康的先天性感染和免疫缺陷患者的致命性感染。HCMV 基因组由~230 kb 的双链 DNA 构成，编码 200 余个基因，其中可能有 50%以上的基因是具有未知功能的。因此，对 HCMV 基因组中未知功能基因的讨论，有助于深化理解 HCMV 的致病机制和生物学特性。UL145 和 UL13 是 HCMV 基因组中两个未知功能基因。UL145 编码的蛋白质是一个约 22.6 kDa 的蛋白质，其缺失型病毒与野生型病毒相比，病毒复制减缓，并且在感染初期病毒产量降低。UL13 编码的蛋白质是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，其缺失型病毒的病毒感染能力也会受到影响。虽然 UL145 和 UL13 参加 HCMV 感染和复制过程中发挥了重要的生物学功能，但目前对这两个基因的具体转录特点和转录本结构等方面的讨论还较少。因此，开展 UL145 和 UL13 基因的转录特点和转录本结构讨论，有助于进一步探究 HCMV 的基因调控机制，揭示 HCMV 感染的分子机理。也为相关的抗病毒药物的研发提供科学基础。二、讨论内容及方法1. 讨论内容（1）对 UL145 和 UL13 基因的转录起始位点（TSS）进行鉴定，并分析转录起始区域的启动子结构。（2）使用普通 PCR 和实时 PCR 等技术，检测 UL145 和 UL13 基因的转录量，并分析不同细胞系和病毒株系中的转录水平差异。（3）开展核糖核酸聚合酶（RNA polymerase）定点扫描分析，鉴定 UL145 和 UL13 基因可能的剪接变体。2. 讨论方法（1）应用反转录 PCR（RT-PCR）和 5’ RACE 等技术鉴定 UL145和 UL13 基因 TSS 及其启动子结构。（2）利用普通 PCR 和实时 PCR 技术对不同类型的 HCMV 感染细胞中的 UL145 和 UL13 基因进行定量检测。精品文档---下载后可任意编辑（3）开展 RNA polymerase 定点扫描分析，筛选 UL145 和 UL13基因的可能剪接变体。并通过 Sanger 测序和生物信息学分析等技术验证。三、讨论预期结果（1）鉴定 UL145 和 UL13 基因的 TSS 和启动子结构，并分析其转录起始区域的启动子结构。（2）分析不同类型的 HCMV 感染细胞中 UL145 和 UL13 基因的转录水平差异，初步探究其编码蛋白质表达的调节机制。（3）发现可能的 UL145 和 UL13 基因的剪接变体，并初步探究可能的差异表达功能。四、讨论意义（1）揭示 HCMV 感染的分子机理和基因调控机制，有助于深化了解 HCMV 的致病机制和生物学特性。（2）为探究相关抗病毒药物的研发提供重要的科学基础。