1 实验二 细菌抹片的制备及染色 一、 提前十分钟进入实验室，抄写板述。上课，点名入座。 板述内容： 一）、目的要求 1、掌握细菌抹片的制备方法 2、掌握细菌的革兰氏染色法 二）、实验内容 1、每人做一张葡萄球菌的固体抹片，用美兰染色。 2、每人做一张大肠杆菌与葡萄球菌的混合抹片，并用革兰氏法染色。 3、油镜观察自制的玻片及真菌标本片，（烟曲霉、黄曲霉、酵母菌） 4、组织抹片，并用瑞氏染色液染色（示教） 三）作业 1、叙述细菌抹片的制备方法 2、叙述革兰氏染色的方法 3、绘出细菌形态图并注明染色方法 二、 总结上次实验作业，有两个突出问题。 1、 多数同学画的是书上的细菌图，细胞臂、荚膜清晰可见，而镜检时只能看到细菌的大致形态，如大肠杆菌是一个两端钝圆的杆状轮廓，另外，镜检时菌毛和鞭毛是不能观察到的，除非用特殊的染色方法。 2、 有的同学没有用圆规画图，图片绘制得过大或过小。 三、 实验第一部分：抹片的制备 1、 实验的目的和意义 细菌细胞微小，无色而半透明，原样直接在普通光学显微镜下观察，只能大致见到其外貌，制成抹片和染色之后，则能较清楚地显示其形态和特殊构造，也可以根据不同的染色反应，作为鉴别细菌的一种依据。 2、 细菌抹片的制备 进行细菌染色之前，须先作好细菌抹片，其方法如下： （1）玻片准备 载玻片应清晰透明、洁净而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好。如 2 有油渍，可按下列方法处理： A、滴上 95%酒精 2-3滴，用洁净纱布揩擦，然后在酒精灯火焰上轻轻拖过几次。 B、若上法仍未能去除油渍，可再滴上 1-2滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯火焰上轻轻通过。 （2）抹片 所用材料情况不同，抹片方法亦有差异。 A、液体材料（如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等）可直接用灭菌接种环取一环材料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。 B、非液体材料（如菌落、脓、粪便等）则应先用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于玻片中央，然后再用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层。 C、组织脏器材料，先用镊子夹持局部，然后以灭菌或洁净剪刀取一小块，夹出后将其新鲜切面在玻片上压积或涂抹成一薄片。 如有多个样品同时需要制成抹片，只要染色方法相同，亦可以在同一张玻片上有秩序地排好，作多点涂抹，或者先用蜡笔在玻片上划分成若干小方格，每方格涂抹一种样品，需要保留标本片，应贴标签，注明菌名...
