第七章 微生物的生长及其控制 1 获得目标微生物的纯培养分离技术有哪些
答: 1.稀释法 (1)平皿倾注法 (2)平板涂布法 预先制备平板
然后制备并吸取适度稀释的菌液,滴于各平板中央(每皿一滴,约0
05ml),用无菌刮刀将菌液均匀涂布于平板表面
2.平板划线法 划线的方式很多,其目的都是使平板上菌体逐渐变稀,最终形成单菌落
划线用平板也要预先制备
常用的是以下两种方式: (1)针尖稍弯的接种针火焰灭菌并冷却后,取样;在靠近平皿边缘处的平板上,将针尖的弯曲部位接触平板,接种棒与平板面成30°~40°角,划3条~4条平行线;转动平皿约50°角,灼烧接种针,冷却后,通过前一区划2条~3条平行线,并继续划2条~3条不通过前一区的平行线;再转动平皿„„如此划4区~5区(图 3—5A)
此种方法适用于分离纯化固体培养基上的培养物
(2)灼烧并冷却的接种环取样后,在平板上作连续划线
此适用于液体样品
3.单细胞挑取法 把一滴菌悬液置于载玻片上,用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管,在显微镜下对准某一个单独的细胞吸取,再接种于培养基上培养
此法限于高度专业化的科研
4.利用选择培养基分离法 (1)采用选择性高的培养基 例如,以纤维素为唯一碳源,分离分解纤维素的微生物;用无氮培养基分离自生固氮菌;在15ml培养基中加 25%乳酸 1滴~2滴以抑制细菌生长,把受细菌污染的霉菌分离出来
(2)培养基中加抑制剂 例如,结晶紫 10mg/L可抑制G+细菌生长,利于分离G-细菌;KMnO4100mg/L抑制细菌和霉菌生长,利于分离放线菌;制霉菌素 50mg/L或放线酮 50mg/L利于分离纯化放线菌;分离纯化霉菌或放线菌时,加链霉素 30mg/L、金霉素 2mg/L可抑制细菌生长
5.其他 如,高温处理(80℃ 15min或 100℃ 10min)分离芽孢杆菌;4%KOH处理痰液,