实 验 一 ： 感 受 态 细 胞 的 制 备 1 . 原 理 ： 当 实 验 室 获 得 了 一 个 新 的 质 粒 时 ， 而 这 个 质 粒 并 未 转 化 到 宿 主 菌 体 内 ， 则 需要 该 技 术 进 行 细 菌 的 转 化 ， 以 大 量 获 得 这 一 质 粒 。 转 化 细 菌 的 方 式 有 很 多 种 ， 如电 转 化 法 、 脂 质 体 转 染 法 、 显 微 注 射 法 、 CaCl2 处 理 法 制 备 感 受 态 细 胞 等 。 一 般的 实 验 室 都 应 用CaCl2 处 理 细 菌 ， 改 变 细 胞 膜 的 结 构 ， 使 质 粒DNA 能 穿 过 细 菌细 胞 膜 进 入 细 胞 。 然 后 在 选 择 培 养 基 中 培 养 转 化 处 理 过 的 细 菌 ， 转 化 成 功 的 细 菌可 在 抗 菌 素 培 养 基 上 生 长 形 成 菌 落 。 这 一 方 法 是 分 子 生 物 学 常 用 实 验 方 法 。 2 . 实 验 材 料 2.1 LB 液 体 培 养 基 2.2 0.1mol/L CaCl2 溶 液 ：称 取 1.1g 无 水 CaCl2，溶 于 90ml 双 蒸 去 离 子 水 中 ，定 容 至 100ml， 用 0.22μm 滤 器 过 滤 并 装 入 灭 菌 试 剂 瓶中 ， 4℃保存。 2.3 DH5α 菌 株， 冰， 牙签， 无 菌 滤 纸， 50ml 离 心管， 枪头（以 上 需 灭 菌 ）；移液 器 ， 摇床， 冷冻离 心机， 涡旋震荡器 ， 恒温摇床， 恒温培 养 箱， 超净工作 台 ， 普 通 冰箱， -70℃冰箱 3 . 操 作 方 法 3.1 从 37℃培 养 12— 16h 的 平 板 上 ， 用 无 菌 牙签挑 取 一 个 单 菌 落 ， 转 移到含 有 3ml LB 培 养 基 的 试 管内 ，37℃振 摇过 夜 。次 日 取 菌 液 1ml，接 种 到 含 有 100ml LB 培 养 基 的500 ml 烧 瓶中 ， 37℃剧 烈 振 摇培 养 约2— 3h（振 摇速 度 为200— 300r/min）， 待OD600 值 达 到0.3— 0.4 时 ， 将 烧 瓶取 出 立 即 置 冰浴10— 15min。 3.2 自 该 步 骤 起 皆 需 无 菌 操 作 。 在 无 菌 条 件 下 将 细 菌 转 移到 一 个 灭 菌 处 理过 的 、 冰预 冷的 50 ml 离 心管中 。 3.3 4℃离 心， 4000g× 5min ...
