方 法 名 称 水 质 总 大 肠 菌 群 和 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 （ 纸 片 快 速 法 ） 申 请 人 项 目 负 责 人 员 制 定 原 因 验 证 检 测 方 法 符 合 实 验室 要 求 、 确 保 数 据 准 确 性与 有 效 性 方 法 适 用 范 围 适 用 于 地 表 水 、 地 下 水 及 废 水 中 的 总 大 肠 菌 群 和 粪 大 肠 菌 群 的 快 速 测 定 。 方 法 来 源 HJ 755-2015《 水 质 总 大 肠 菌 群 和 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 纸 片 快 速 法 》 仪 器 、 试 剂 和 环境 的 要 求 1.仪 器 和 设 备 1.1 高 压 蒸 汽 灭 菌 器 1.2 培 养 箱 1.3 冰 箱 1.4 采 样 瓶 1.5 试 管 1.6 水 质 总 大 肠 菌 群 和 粪 大 肠 菌 群 测 试 纸 片 2.试 剂 ： 2.1 硫 代 硫 酸 钠 2.2 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 采 样 和 测 试 过 程 中 ， 所 用 到 的 玻 璃 器 皿 需 灭 菌 后 方 可 使 用 。 方 法 描 述 按 MPN法 ， 将 一 定 量 的 水 样 以 无 菌 操 作 的 方 式 接 种 到 吸 附 有 适 量 指 示 剂 （ 溴甲酚紫和 2,3,5-氯化三苯四 氮唑即TTC） 以 及 乳糖等营养 成分的 无 菌 滤纸上， 在特定 的 温度（ 37℃或44.5℃） 培 养 24h， 当细菌 生长繁殖时， 产酸 使pH值 降 低 ， 溴 甲酚紫指 示 剂 由 紫色 变 黄 色 ， 同 时， 产气 过 程 相 当的 脱 氢 酶在适 宜 的 pH范 围 内 ，催 化底 物 脱 氢 还 原 TTC形 成红 色 的 不 溶 性 三苯甲（ TTF）。即可 在产酸 后 的 黄 色 背 景 下 显 示 出 红 色 斑 点 （ 或红 晕 ）。 通 过 上述 指 示 剂 的颜 色 变 化就 可 对 是 否 产酸 产气 作 出 判 断 ， 从 而 确 定 是 否 有 总 大 肠 菌 群 或粪大 肠 菌 群 存 在， 再 通 过 查 MPN表 就 可 得 出 相 应 总 大 肠 菌 群 或粪 大 肠 菌 群 的 浓度值 。 检测结果的判断 1.结果判读： （1） 制片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性。 （2） 纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。 （3） 纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性。 （4） 纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性。 （5） 纸片无变化，为阴性。 2.结果计算： 根据不同接种量的阳性纸片数量，查MPN表得到MPN值，按公式换算并报告1L水样中总大肠菌群或粪大肠菌群数： C=100*M/Q 式中： C—水样总大肠菌群或粪大肠菌群浓度（MPN/L） M—查MPN表得到的MPN值(MPN/100ml) Q—实际水样最大接种量（ml） 100—为10*10ml，其中，10将MPN值的单位MPN/100ml转换为MPN/L，10ml为MPN表中最大接种量。 3.结果表示： 测定结果保留二位有效数字，大于等于100时以科学计数法表示，结果的单位为MPN/L。平均值以几何平均计算。 附件说明 表1 运行说明 经验证该方法符合我实验室使用。 审批意见 技术经理： 日 期： 总经理： 日 期： 表1
