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THP-1-细胞培养

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生物实验:THP-1 细胞培养 THP-1 是人外周血的单核细胞系,最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞,适合用于转染或感染实验。其表面抗原 HLA 型为:A2,A9,B5,DRw1,DRw2。工具/原料培养基:RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)胎牛血清:Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)二甲亚砜:DMSO (SIGMA D2650)双抗 P/S (Penicillin/Streptomycin)(GIBCO #15140-122)方法/步骤1. 1细胞培养:THP-1 细胞培养于含有 10%FBS+1%P/S 的 RPMI-1640 培养基中,培养环境为 37℃,5%CO2。可以每隔 3-4 天加一些新鲜的培养基,或直接传代。2. 2细胞传代:当细胞密度达到约 8x10^5cells/ml 左右时,即可进行传代。由于是悬浮细胞,可直接将细胞吸出,离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。3. 3细胞冻存:取差不多 1x10^7 个细胞,用 1ml 含有 10%DMSO 的 FBS 重悬,转入冻存管,于-80℃冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。END注意事项细胞养不好,可能的原因有,THP-1 细胞特别依赖细胞浓度,ATCC 上 10 5到 106 每 ML,是一个很高的密度,细胞少了就不太容易养好。细胞株的来源很重要,如直接来源于 ATCC(American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心)生命力要强于国内细胞库的。注意细胞的密度一定要高,介于 5×105—— 106/ML 之间,增值的快。细胞数量太少,不适合 THP-1 生长,一般状态不好的 THP-1 在培养了 3 天后数量仍然不多,继续培养一天或者两天,培养基 严重泛黄,细胞数会增加。这一点不同于同是单核细胞系的 U937 细胞。THP-1 细胞适合在细胞 Ph 环境偏酸性环境生长,对培养基变化非常敏感,所以 尽量使用相同 Ph 的 1640。传代后切忌常移出培养箱观察,否则会影响细胞生长,状态变差,一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般 THP-1 生长相当快,对于状态已经不好的情况,建议传代后 3~4 天再观察,一般 4 天时间培养基已明显泛黄,细胞数量巨增;1)THP-1 细胞喜欢酸性条件,你不要老是换培养基。越酸的条件,细胞密度越大,细胞就长得越好;2)不要频繁换液,一般 2-3 次换液离心一次(只是补充培养基)3) 使用 1640(ATCC 推荐),注意加碳酸氢钠 2.5g 就可以了,宁酸勿碱; 4)注意冻存的时候密度大些,推荐用血清冻存。复苏比较慢,建议开始用小瓶,不要用一次性的。内容总结(1...

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