法检测人血清血浆样本β转化生长因子β浓度

双抗体夹心 ELISA 法检测样本中 TGF-β1 的浓度TGF-β1简介：转化生长因子包括 TGF-α 和 TGF-β 两大类，在免疫调控、炎症和肿瘤发生过程中有多种生理或病理的功能。转化生长因子是一包括骨形成蛋白、激活素和抑制素在内超家族的成员，并且 TGF-β 是已知最强的免疫调控分子之一。在人的体内有三种 TGF-β 亚型，TGF-β1, TGF-β2 和 TGF-β3，是由各种转化细胞及包括淋巴细胞和单核细胞在内的正常细胞合成和分泌的。人类的 TGF-β1 是一个 25kDa 通过二硫键连接在一起的没有糖基化修饰的同源二聚体。TGF-β1 生物学活性包括通过促进合成和抑制降解来提高细胞外基质的沉积和通过多种机制提高免疫抑制的作用。检测原理:本试剂盒采纳双抗体夹心ELISA法检测样本中TGF-β1的浓度。TGF-β1捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TGF-β1会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人TGF-β1抗体后，抗人TGF-β1抗体与TGF-β1接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在TGF-β1将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，TGF-β1浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对比未知样本中OD值，即可算出标本中TGF-β1浓度。实验过程需自备的材料：1.不同规格的加样枪及相应的枪头； 2.酶标仪；3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水；注意事项:1.试剂盒请保存在2～8℃。2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。3.若标准品复溶后，请在三天内用完。4.底物请勿接触氧化剂和金属。5.加样时，请及时更换枪头，避开交叉污染。6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。8.室温反应，请严格控制在26-28℃。9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。11.加样过程中避开气泡的产生。12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞...