检测两种蛋白质之间相互作用得实验方法比较1、 生化方法●免疫共沉淀 免疫共沉淀就是以抗体与抗原之间得专一性作用为基础得用于讨论蛋白质相互作用得经典方法.改法得优点就是蛋白处于天然状态,蛋白得相互作用可以在天然状态下进行，可以避开认为影 响 ; 可 以 分 离 得 到 天 然 状 态 下 相 互 作 用 得 蛋 白 复 合 体 。 缺点:免疫共沉淀同样不能保证沉淀得蛋白复合物时候为直接相互作用得两种蛋白。另外灵敏度不如亲与色谱高。●F ａ r—Ｗ est ｅ r ｎ 又叫做亲与印记。将 PAGE 胶上分离好得凡百样品转移到硝酸纤维膜上,然后检测哪种蛋白能与标记了同位素得诱饵蛋白发生作用，最后显影。 缺点就是转膜前需要将蛋白复性。ﻫ2、 等离子表面共振技术（Surfac ｅ ｐｌ asmo ｎ ｒｅ so ｎ ance)该技术就是将诱饵蛋白结合于葡聚糖表面,葡聚糖层固定于几十纳米厚得技术膜表面。当有蛋白质混合物经过时,假如有蛋白质同“诱饵”蛋白发生相互作用，那么两者得结合将使金属膜表面得折射率上升，从而导致共振角度得改变。而共振角度得改变与该处得蛋白质浓度成线性关系,由此可以检测蛋白质之间得相互作用。该技术不需要标记物与染料，安全灵敏快速,还可定量分析。缺点:需要专门得等离子表面共振检测仪器。３、 双杂交技术 原理基于真核细胞转录因子得结构特别性,这些转录因子通常需要两个或以上相互独立得结构域组成．分别使结合域与激活域同诱饵蛋白与猎物蛋白形成融合蛋白，在真核细胞中表达,假如两种蛋白可以发生相互作用,则可使结合域与激活域在空间上充分接近,从而激活报告基因． 缺点：自身有转录功能得蛋白会造成假阳性.融合蛋白会影响蛋白得真实结构与功能。不利于核外蛋白讨论,会导致假隐性.5、 荧光共振能量转移技术 指两个荧光法色基团在足够近（〈100 埃)时，它们之间可发生能量转移得现象。荧光共振能量转移技术可以讨论分子内部对某些刺激发生得构象变化,也能讨论分子间得相互作用。它可以在活体中检测,非常灵敏,分辩率高,能够检测大 分 子 得 构 象 变 化 , 能 够 定 性 定 量 得 检 测 相 互 作 用 得 强 度 。 缺点 此项技术要求发色基团得距离小于 100 埃。另外设备昂贵,还需要融合Ｇ FP 给蛋白标记。ﻫ此外还有交联技术(ｃ r ｏ s ｓ－ｌｉn Ｋ ing)，蛋白质探针技术,噬菌体展示技术(P ｈａ g ｅ d ｉ s ｐｌa ｙ）以及生物信息学...
