菌落总数与大肠菌群测定(固体样品)药 品:1、平板计数琼脂2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)3、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)4、氯化钠设备材料:烧杯 、三角瓶、广口瓶、培育皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。一、 准备工作(指导书就是按一个样品所需物品准备得,实验室可按样品量增加)1、平板计数琼脂培育基准备用于菌落总数测定 将三角瓶放在电子称上,去皮,按平板计数琼脂使用说明称量,加 200ml蒸馏水搅拌,放电炉上煮沸加热煮沸,充分溶解,盖上硅胶塞,用报纸或布包好,再用橡皮筋扎紧。2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤用于大肠菌群测定(a)将烧杯放在电子称上,去皮,按使用说明称量,加 100ml 蒸馏水搅拌,放电炉上煮沸,充分溶解。(b)用 10ml(毫升)得吸管分装到 9 支(18*180 规格)试管中,每支试管加 10ml 得月桂基溶液 LST(合计 90 毫升)。(c)9 支试管分别放入倒气管(开口向下),排气,盖上硅胶塞。3、0、85%得生理盐水用于样品稀释将广口瓶去皮,称取氯化钠 1、91g 加 225ml 蒸馏水,摇匀,用报纸或布包好,再用橡皮筋扎紧; 同样配制第二瓶。4、准备 2 个空试管,盖上硅胶塞用于样品稀释。5、准备 8 个培育皿,用布包扎好。6、准备至少 3 支 5ml 与 1 支 10ml 带有刻度得吸管,用布包扎好(顶部可用棉球塞住,防止吸液时,液体不慎吸入洗耳球)。7、准备操作得工具:剪刀 1 把、镊子 1 个、勺子等打开产品包装所需工具,用布包扎好。二、使用灭菌锅灭菌 1、检查灭菌锅底部加热管水位就是否正常,水位要高过加热丝。 2、将上面准备好得 7 步骤物品逐一放入锅内,注意:滴定管吸口向下,有棉球得向上。 3、盖上灭菌锅盖子时,将排气管插到排气口内,注意从对角线开始拧紧螺丝,将排气阀打开(安全阀始终关闭),通电后,待排气阀放气 3 分钟后(锅内冷空气已经排完),关闭排气阀。 4、查瞧灭菌锅得压力表,当温度升到 121°,压力升到 0、1MP(兆帕)时,灭菌维持 15 分钟后(温度与压力不能过高或者过低),断电自然冷却到接近“0”度后,慢慢打开排气阀,再对角拧开灭菌锅。三、无菌操作 进无菌室前得准备:放好工具(酒精灯,记号笔,消毒用 75%酒精棉球,洗耳球,电子称),打开紫外线杀菌灯,杀菌 30 分钟后关闭,再等 10 分钟后进入无菌室。(无菌室缓冲间应放有:白色衣服、帽子、鞋子与口罩等)。 1、待灭菌锅自然冷却后,取出 6 件灭菌好得物品,留下平板计数琼脂培育基(PCA)在灭菌锅里待用(该液体凉后...
