细胞培育基础篇基础篇-无菌操作基本技术 1、 实验进行前,无菌室及无菌操作台(lami ｎ ar flow) 以紫外灯照射 30—６０ 分钟灭菌,以７ 0％ etｈ anol 擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转 1 ０ 分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培育基相同亦不共享培育基,以避开失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以 70% e ｔ hano ｌ 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转 1 ０分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。 2、 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以临时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以 70％ ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。 3、 小心取用无菌之实验物品,避开造成污染、勿碰触吸管尖头部或就是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约 45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4. 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或就是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Ｃ l ａ ss II)。操作过程中,应避开引起 aerosol之产生,小心毒性药品,例如Ｄ MS Ｏ及 TPA 等,并避开尖锐针头之损害等、 5、 定期检测下列项目: 5。1. CO2 钢瓶之 CO2 压力。5.2、 CO2 培育箱之Ｃ O ２浓度、温度、及水盘就是否有污染(水盘得水用无菌水,每周更换)。 ６、 水槽可添加消毒剂(Z ｅ p ｈ ri ｎ 1:7 ５ 0),定期更换水槽得水。基础篇—血清 1. 血清必须贮存于–２ 0～–70℃,若存放于 4℃,请勿超过一个月。假如一次无法用完一瓶,可将 40~4５ m ｌ 分装于无菌 50m ｌ离心管中,由于血清结冻时体积会增加约１ 0 ％, 必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。 2、 一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培育基内一起过滤,勿直接过滤血清。３。 瓶装(５ 00ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法):–20℃至 4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以５ 0ml 无菌离心管可分装４ 0～45 m ｌ、在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀得发生。勿直接由–2 ０℃直接至 37℃解冻,因温...
