环境中微生物的检测和分离纯化

环境中微生物的检测和分离纯化一、实验目的：1.熟悉常用微生物培育基的配制方法。2.学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。3.用平板划线法和稀释法分离微生物。4.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。二、实验原理：（一）微生物的分离与纯化：土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此，土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离和纯化常用的是平板分离法。为了获得某种微生物的纯培育，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、温度和氧等条件要求不同，而供给它适宜的培育条件，或加入某些抑制剂，造成抑制其他菌生长而利于此菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物。再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直至得到纯菌种。（二）平板菌落计数法：平板菌落计数法是将样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培育，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。此法缺陷：操作繁琐，结果需要培育一段时间才能取得，测定结果易受多种因素的影响。此法优点：可以获得活菌的信息，被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等的含菌指数或污染程度的检测。三、实验材料和仪器：土样 10g，未知菌变形杆菌单菌落平板和无菌水。取液器（5000ul、1000ul 各一支），培育箱，培育皿（20 个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，5000ul、1000ul 无菌吸头，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。四、实验步骤：（一）培育基的制备（第二次实验时准备）：肉汤蛋白胨培育基： 牛肉膏 2g 蛋白胨 4g NaCl 2g 蒸馏水 400mL 琼脂 8g 1. 称量：按上述配方称量各类物质。 2. 溶解：在 400mL 水中溶解牛肉膏、蛋白胨和 NaCl，混合加热溶解。 3. 调 pH 值：调至 7.2-7.6 4. 加凝固剂：加入称量好的琼脂，混合均匀。 5. 分装、包扎和灭菌、倒平板。（二）稀释法分离土壤中微生物：1. 采土样（助教完成）：选择肥沃土壤,去表层土,挖 5~20cm 深度的土壤数 10g,装入烧杯,带回实验室。2. 制备土壤稀释液（助教完成）：土样 1.0g，无菌水 99ml，...