第1页共17页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共17页植物组织培养的一些注意事项一、常用培养基主要特性1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER等培养基。其中MS培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高,微量元素种类齐全,其养分数量及比例均比较合适,广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER培养基由MS培养基演变而来。2、硝酸钾含量较高的培养基包括B5、N6、LH、GS等培养基。①B5培养基B5培养基除含有较高的钾盐外,还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素,较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。②N6培养基N6培养基(朱至清等1975)系我国学者创造,获国家发明二等奖,适用于单子叶植物花药培养,柑橘花药培养也适合,在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。③SH培养基是矿盐浓度较高的一种培养基,其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵(NH4H2PO4)提供的,这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。3、中等无机盐含量的培养基①H培养基本培养基大量元素约为MS培养基的一半,仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低,微量元素种类减少,而含量较MS为高,维生素种类比MS多。适于花药培养。②尼奇培养基(Niotsch1969)此培养基与H培养基成分基本相同,仅生物素比H培养基高10倍。也适合于花药培养。③米勒培养基(Miller1963)此培养基和Blaydes(1966)培养基二者成分完全相同。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。4、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种:①改良怀特培养基(White1963)②WS培养基(Wolter&Skoog1966)③克诺普液(Knop1965)花卉培养上用得多。④贝尔什劳特液(Berthelot1934)⑤HB培养基(Holley&Baker1963)此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的第2页共17页第1页共17页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共17页茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/2克诺普(Knop)液稍多,微量元素用贝尔什劳特液,每升培养基中加0.5ml。二、与培养基有关的一些细节问题1、培养基所用药品应采用等级较高的化学纯CP(三级)及分极纯AR(二级),以免杂质对培养物造成不利影响。2、调节PH也可用精密pH试纸(应在干燥器中保存,以免吸湿而失效)。培养基过酸的可用1mol/L氢氧化钠(NaOH)来调节;培养基过碱的可用1mol/L盐酸(HCl)来调节(1mol/LNaOH的配制方法是称40gNaOH,溶解后加入蒸馏水,定容到1000ml即可。1mol/LHCl的配制方法是量取12mol/LHCl84ml,加水定容至1000ml)。经高压蒸汽灭菌后,由于某些成分的分解(如蔗糖的分解)或氧化,酸度会增加(pH值一般可降低0.2)。有时玻璃器皿质量较差,其中一部分物质溶解,也会影响酸度的变化。这些在调整pH值时都要考虑进去。分装后应立即灭菌,若因故不能及时灭菌,最好放入冰箱中在24h内完成灭菌工作。灭菌时压力表读数为0.8kg/cm2～1.1kg/cm2,121℃时保持15min～20min即可。3、某些生长调节物质,如吲哚乙酸、玉米素及某些维生素等物质遇热不稳定,因此不能进行高压灭菌,而需用过滤方法灭菌,经过滤灭菌的溶液,可在琼脂培养基温度下降到大约40℃时加入到已高压灭菌的培养基中。4、配好的培养基可放到培养室中预培养3d,若没有污染反应,则证明是可靠的,可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存,含有生长调节物质的培养基在4℃～5℃低温下保存则更理想。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基应在配制一周内用完,其他培养基至多也不能超过一个月。一般情况下,两周内应用完,以免干燥变质。三、培养材料及消毒1、取材季节的影响：大多数植物应在其生长开始的季节采样,生长末期或已进入休眠期,则外植体对诱导反应迟钝或无反应。第3页共17页第2页共17页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共17页2、器官的生理状态和发育年龄：沿植物的主轴,越向上的部分所形成的器官其生长的时间越短,其生理年龄也越老,越接近发育上的成熟,越易形成花器官。反之,越向下,其生理年龄越小。木本植物的组织培养中,以幼龄树的春梢嫩枝段或基部的萌条较好,下胚轴与具有3对～4对真叶的嫩茎段,生长效果也较好。一般情况下,幼年组织比老年组织具有较高的形态发生能力。3...
