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第1页共8页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共8页ACPDDRT-PCR技术摘要：随着基因组计划的顺利实施,大量的生物信息被解析,分离和鉴定差异表达基因已成为分子生物学研究的热点。mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)是目前有效筛选、分离差异表达基因的方法之一。就DDRT-PCR的基本原理简要概述，阐明了该技术在生物生长发育、杂种优势、抗逆性基因研究中的应用等。关键词:：mRNA差异显示技术杂种优势抗性ACP技术Abstract:WiththedevelopmentofGenomeProjectandanalysisofmassivebiologicalinformation,separationandidentificationofdifferenceexpressinggenehavebecomeahotissueinmolecularbiologyresearch1ThemRNAdifferentialdisplay(DDRT-PCR)isoneofeffectivemethodsforscreeningandisolatingdifferentiallyexpressedgenes.TheprinciplesofDDRT-PCRtechniquewereintroduced1.Theusabilityandachievedresearchresultsbyusingthismethodweresummarizedfromtheaspectsofricedevelopmentgene,heterosisgeneandtheresistancegene1TheprospectiveapplicationofDDRT-PCRinpaddyricemutantandresistancetoagriculturalchemicalsresearchwasalsoexploredinthepaper.Keywords:mRNAdifferentialdisplayHeterosisResistanceACP许多年以来，分离差异表达基因的方法仅限于差异筛选cDNA文库，直到1992年Liang等发明了一种检测基因转录模式的方法，即mRNA差异显示技术(mRNADifferentialDisplayReverseTranscriptionPCR,DDRT-PCR)[1]，它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，目前已广泛应用于分离鉴定组织特异性表达的基因，差别基因表达（differentialgeneexpress）是细胞分化的基础[2]。mRNA差别显示技术正是对组织特异性表达的基因进行分离的一种快速而行之有效的方法。它第一次实现了同时快速灵敏地检测到真核细胞中大部分的差异表达转录体的目的[3]。近些年来，在分离和克隆差异表达基因的功能基因组学研究中，国内外学者又发展了多种分析方法，如，代表性差异分析、RNA指纹技术、RC4D、SAGE、抑制消减杂交技术、cDNA-AFLP、iAFLP及基因芯片技术等方法克隆差异表达基因[4]。这些方法第2页共8页第1页共8页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共8页的发明与应用，取得了许多成就，克隆了一系列的差异表达基因。这些方法各具独特优点，但同时也具有其自身不同的缺陷。这些技术的原理和优缺点比较已有许多综述总结。[5]引物退火时能否与其靶序列特异结合，是PCR能否成功扩增的关键因素之一，因此引物结构的优化非常重要。退火温度的高低决定引物是否能与其互补链完全结合，还是有一个或多个碱基的错配，因此通过调整退火温度就可以增加引物与模板结合的特异性[6]。许多研究者提出了各种办法来提高引物退火的特异性，如在引物的5’端增加一段通用引物序列，或加一段同聚物，或加上一段环状序列，以增加PCR扩增的特异性和退火的稳定性，但这些方法并不能消除初始反应的非特异性退火[7]。作者将介绍一种在DDRT-PCR基础上发展起来的对差异表达基因克隆的新方法，即引物退火控制技术(AnneallingControlPrimer,ACP）。该方法则可较好地消除初始反应的非特异性[8]。1ACP技术的基本原理ACP技术通过一种特殊引物，使得特异性和灵敏度同时兼顾。具体的引物结构是（图1）:退火控制引物由独特的三部分组成，3＇端和5＇端部分由中间的调节部分连接。3＇端部分是核心部分，是一段基因特异性结合段，能与模板完全互补，但长度较短（10bp）左右，这个长度的核酸退火温度基本在37℃左右，也就是普通随机引物的退火温度；中间调节的部分为多聚脱氧次黄苷[poly(dI)]，一般由5个脱氧次黄苷(dI)组成，在控制引物的退火温度时起着关键的作用[9]。ACP技术主要由以下三个部分组成：逆转录合成第一条链和两个不同阶段的PCR反应；5＇端部分是通用引物序列。这三部分的具体作用为：3＇端的核心序列用于第一、第二轮扩增时，保证扩增的灵敏度；中间的调节部分是ACP技术实现的关键区域，作用主要有以下两方面：①提高核心序列识...