微生物学实验室常用试剂与培养基第一节常用试剂及其使用方法一、诊断用纸片⑴杆菌肽纸片(0.04U/片):抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株:D群链球菌阴性,A群链球菌阳性。⑵SMZ纸片(1.25μg/片、23.75μg/片):出现抑菌圈即为敏感。质控菌株:D群链球菌阳性,A群链球菌阴性。⑶新生霉素纸片(5.0μg/片):抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株:表皮葡萄球菌阳性,腐生葡萄球菌阴性。⑷O129纸片、奥普托欣(Optochin)纸片:参见第五节《生化试验培养基》。二、诊断用血清1.沙门菌属诊断血清⑴A-F群O多价诊断血清。⑵特异O群因子诊断血清:常用的有O2,O4,O7,O9,O10诊断血清。⑶特异H因子诊断血清常用的有Ha,Hb,Hc,Hd,Hgm,Hi,Hf、Vi因子诊断血清。2.志贺菌属诊断血清志贺菌属4种多价血清:痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清,福氏志贺菌多价血清及分型血清(1~6型),宋内志贺菌诊断血清,鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。3.致病性大肠埃希菌诊断血清肠致病性大肠埃希菌(EPEC)诊断血清,产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)诊断血清,肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)诊断血清,肠出血性大肠埃希菌(EHEC)诊断血清O157:H7。4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清6.链球菌分类诊断血清7.肺炎链球菌诊断血清8.耶尔森菌诊断血清三、常用染色液1.革兰染色液⑴结晶紫溶液A液:结晶紫20g,95%乙醇20ml;B液:草酸铵0.8g,蒸馏水80ml。染色前24h将A液、B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。⑵碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml。将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水,使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。⑶脱色液:95%乙醇⑷复染液:沙黄2.5g,95%乙醇100ml为贮存液,取贮存液10ml,加蒸馏水90ml为应用液。2.抗酸染色液⑴碱性复红染色液:①萋纳石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和溶液10ml,5%石炭酸溶液90ml。②脱色液:浓盐酸3ml,95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液):美蓝乙醇饱和溶液30ml,100g/L氢氧化钾溶液0.1ml,蒸馏水100ml。⑵金胺O-罗丹明B染色液:①罗丹明B液:罗丹明B0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液:金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液:吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。3.鞭毛染色液(改良Ryu法)A液:5%石炭酸10ml,鞣酸2g,饱和硫酸铝钾溶液10ml;B液:结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。4.异染颗粒染色液甲液:甲苯胺蓝0.15g,孔雀绿2g/L,95%乙醇2.0ml,蒸馏水100ml。乙液:碘2g,碘化钾3g,蒸1馏水300ml。先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后,加蒸馏水至300ml。5.荚膜染色液⑴印度墨汁或50g/L黑色素水溶液⑵5g/L苯胺蓝水溶液。第二节基础培养基一、液体基础培养基1.蛋白胨水[用途]用于细菌靛基质试验;一般细菌培养和传代。[配法]蛋白胨(或胰蛋白胨)10g,氯化钠5g,蒸馏水1L。将上述成分溶于水中,校正pH至7.2,分装试管,每管2~3ml,置121℃灭菌15min备用。[质量控制]大肠埃希菌生长良好,靛基质阳性;伤寒沙门菌生长良好,靛基质阴性。2.营养肉汤[用途]一般细菌的增菌培养,加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。[配法]蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,蒸馏水1L。将上述成分称量混合溶解于水中,校正pH至7.4,按用途不同分装于烧瓶或试管内。经121℃灭菌15min,作无菌试验后冷藏备用。[质量控制]金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好。[保存]置冰箱3周内用完。3.牛肉浸液培养基[用途]细菌培养最基础的培养基,除用于一般细菌的培养外,又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。[配法]新鲜除脂牛肉500g,氯化钠5g蛋白胨10g,蒸馏水1L。先将牛肉清洗,除脂肪、肌腱,并切块绞碎。称取500g置容器加入蒸馏水1L,搅匀后置冰箱过夜,次日煮沸加热30min,并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布进行粗过滤,再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨10g、氯化钠5g溶解后,用氢氧化钠溶液校正pH...