第0页共60页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第0页共60页天津开发区职业技术学院2007——2008学年度第一学期教案（实践课）工学院生物技术系（部）生物专业06年级第1页共60页第0页共60页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共60页课程生物化学实验班级生物061~2姓名张冲实践课教案首页课题名称生物化学实验课程类型实验课课时（或单元）4课时实验课类型生物化学实践教材（名称、作者、出版社）生物化学实验讲义（自编）教学场所生物实验室接受实践教学单位性质与特色教学目的学习柱色谱的原理和操作方法重点、难点分析实验原理与操作技法实践分组要求3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告组长条件与职责管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验第2页共60页第1页共60页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共60页实践课所需仪器设备与条件色谱柱（25毫升滴定管），分液漏斗（250毫升），烧杯，滴管，中性氧化铝和碱性氧化铝（100—200目，干燥失重不大于1%）每组各15克，洗脱剂：95%乙醇和蒸馏水，样品：亚甲基蓝，荧光黄，1毫升每组，滤纸，玻璃棉或脱脂棉实践报告（总结）要求实验题目日期实验目的基本原理实验步骤实验结果与分析思考题小结学生对基本理论的理解一般，操作能力有待进一步提高。说明：由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写教案纸第3页共60页第2页共60页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共60页实验一柱色谱法分离物质原理一、目的要求学习柱色谱的原理和操作方法二、基本原理柱色谱法可看作是一种面—液色普法，它是通过色谱柱进行分离的。色谱柱是一根长约20厘米，内径为2厘米，下端具有一个活塞或具有一橡皮管带有弹簧夹的玻璃管，管内装填活化的固体吸附剂（固定相）如氧化铝、硅胶等。在柱子顶部装一分液漏斗，液体样品从柱顶加入，被吸附在柱的上端，然后从分液漏斗加入洗脱溶剂（流动相）如丙酮、石油醚等，由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，被吸附较弱的组分随溶剂以较快的速率向下移动，各组分随溶剂以不同的时间从色谱柱下端流出，用容器收集。如各组分为不同颜色的物质，则可以观察到谱带。如为无色物质，则不可直接观察到谱带，有时有的物质在紫外光照射下发出荧光，有时也可以分段收集一定体积的流出液，再用薄层色谱或其他方法检定。三、实验内容柱色谱分离有色物质四、仪器和试剂色谱柱（25毫升滴定管），分液漏斗（250毫升），烧杯，滴管，中性氧化铝和碱性氧化铝（100—200目，干燥失重不大于1%）每组各15克，洗脱剂：95%乙醇和蒸馏水，样品：亚甲基蓝，荧光黄，1毫升每组，滤纸，玻璃棉或脱脂棉第4页共60页第3页共60页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第4页共60页开发区职业技术学院教案纸第5页共60页第4页共60页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第5页共60页五、实验步骤1、装柱将已经洗干净并烘干的色谱柱固定在铁架台上，在柱子的底部铺放一点玻璃棉或脱脂棉（不要赛得太紧），然后在柱中装溶剂至一半高，打开柱子下端的活塞，让液体向下流（控制流速每分钟两毫升），将氧化铝分次加入，直到固体离柱的顶部约3—4厘米即可。然后在柱顶加入柱径大小的滤纸或加入5毫升的砂层。不允许柱子的顶部变干（在柱顶必须要保留0.5—1.0厘米高的溶剂以免柱子干裂）。如果不立即使用这个色谱柱，就关好下端的活塞或橡皮弹簧夹。在本实验中在层析柱底端放一点棉花，加入0.5厘米的石英砂，关闭阀门加入10毫升95%乙醇，加入5克氧化铝，开塞保持流速为每秒一滴，使氧化铝均匀下沉（避免出现气泡和裂缝），待氧化铝沉积完成后，再加入1厘米石英砂。2、上样将色谱柱中的溶剂从下端放出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出。用滴管或玻璃棒引流将样品缓慢的注入柱中。注意不要把氧化铝冲浮起来。待样品加完后，放开柱子的活塞使液体流出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出，用0.5毫升乙醇清洗壁上余样；放开柱子的活塞使液体流出，直...
